人脐带血间充质干细胞移植改善大鼠缺血性脑梗死免疫炎性反应的研究

摘要

目的：
　　研究人脐带血间充质干细胞（human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCB-MSCs）移植对大鼠脑梗死炎性因子表达和调节性T细胞（Regulatory T cell,Treg）数量及神经功能缺损的影响。
　　方法：
　　40只健康雄性SD大鼠，随机分成四组，分别是①假手术组（n=10）②缺血再灌注组（n=10）③MSC组（n=10）④生理盐水组（n=10）。假手术组大鼠只分离出颈部动脉，其余三组均采用改良Longa线栓法制作大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注模型（middle cerebral artery occlusion,MCAO）。无菌条件下采集脐带血100ml，体外分离hUCB-MSCs并传代培养，选择第6代培养的干细胞做治疗移植用。内含1ml1×106个hUCB-MSCs的悬液经尾静脉注射入MSC组，将等量的生理盐水采用同样的方式注射到生理盐水组。分别于缺血前、缺血后30min、缺血再灌注2h、3h、6h测定各组实验动物血清中的白细胞介素-6（interleukin IL-6）、γ干扰素（interferon IFN-γ）、IL-10、转化生长因子β（transforming growth factor TGF-β）水平变化，评价hUCB-MSCs移植调节大鼠脑梗死后炎性反应的效果。于1、3、7、14d对大鼠神经功能进行评分，并检测外周血中 Treg细胞表达，评价hUCB-MSCs移植对实验动物的神经保护机制。
　　结果：
　　MSC组、缺血再灌注组和生理盐水组缺血后 IL-6、IFN-γ水平升高，分别在缺血再灌注2h、缺血后30min达高峰，MSC组显著小于缺血再灌注组和生理盐水组；缺血后IL-10、TGF-β水平缺血再灌注组和生理盐水组降低，MSC组升高。在缺血再灌注3、7、14d，缺血再灌注组和生理盐水组的神经功能缺损评分显著高于MSC组（P＜0.05）。缺血后7、14d缺血再灌注组和生理盐水组Treg细胞表达较假手术组明显升高（P＜0.05）；MSC组3、7、14d Treg细胞表达明显高于缺血再灌注组和生理盐水组（P＜0.05）。
　　结论：
　　hUCB-MSCs移植可诱导CD4+CD25+Treg细胞增殖，促炎性因子IL-6、IFN-γ的水平下降，抗炎性因子IL-10、TGF-β的水平升高，减轻免疫炎性反应，促进缺血再灌注大鼠神经功能缺损的恢复，从而减轻大鼠的缺血性脑损伤，具有神经保护作用。

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1.前言

2.材料与方法

2.1主要仪器和试剂

2.2动物模型制备及分组

2.3实验方法

2.4统计学方法

3.结果

3.1 hUCB-MSCs分离及鉴定

3.2 各组神经功能缺损评分比较

3.3各组血清炎性因子水平比较

3.4各组外周血中CD4+CD25+Treg细胞占CD4+T细胞百分比

4.讨论

4.1动物模型的选择及设计

4.2 hUCB-MSCs移植治疗缺血性脑梗死的可能机制

4.3 hUCB-MSCs移植调节大鼠脑缺血再灌注损伤的免疫炎性反应

4.4 hUCB-MSCs移植后外周血中CD4+CD25+Treg细胞的表达变化

4.5小结

5.结论

参考文献

附录

致谢

综述:缺血性卒中的免疫炎性反应研究进展