胞外组蛋白对肝组织的损伤效应与肝衰竭发病机制相关性的研究

摘要

目的:探讨肝衰竭(LF)时胞外组蛋白对肝组织细胞的损伤效应及其机制。
　　方法:通过HE染色及免疫组化观察肝衰竭肝组织中肝脏细胞(主要是肝细胞与内皮细胞)的损伤及炎症细胞浸润情况;收集LF患者血清,测定组蛋白H3与H4、PTA、TBil、Cr、国际标准化比值(international normalized ratio,INR),计算患者终末期肝病模型(model for end-stage liver disease,MELD)评分;比较患者与健康者血清中组蛋白水平,统计分析其与PTA、MELD评分的相关性;用患者血清、培养的L-02人肝细胞裂解上清液、上清液+抗组蛋白H3与H4抗体分别处理培养的L-02细胞、HUVEC细胞,观察细胞形态与凋亡率;用纯化组蛋白处理培养的L-02细胞,观察胞内钙离子浓度及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)活性;用APC预处理的纯化组蛋白处理L-02细胞、HUVEC细胞,观察组蛋白的细胞损伤效应。
　　结果:肝衰竭肝组织中见肝细胞、内皮细胞大量破坏,炎症细胞广泛浸润;与健康者[H3:(42.67±12.80)μg/mL/ H4:(40.34±14.56)μg/mL]比较,患者胞外组蛋白浓度[H3:(5390.29±1032.03)μg/mL/H4:(4205.09±662.34)μg/mL]显著升高(t=32.76/t=39.74,均P<0.01),且患者胞外组蛋白H3/H4水平与PTA均呈负相关(r=-0.325,P=0.038/r=-0.572,P=0.028)、与MELD评分均呈正相关(r=0.359,P=0.021/r=0.568,P=0.007);患者血清、L-02细胞裂解上清液对培养的L-02细胞、HUVEC细胞均有损伤效应,该效应受抗组蛋白抗体抑制[(9.3±1.5)％比(14.3±0.6)%,t=4.259,P=0.02];经组蛋白处理,培养的L-02细胞胞内钙离子浓度([Ca2+]i)上升、Caspase-3活性随组蛋白处理浓度增加而增强,抗组蛋白抗体对Caspase-3活性增强效应有一定的抑制作用[(3.5±0.5)%比(5.2±0.6)%,t=4.242,P=0.02];APC能分解组蛋白,减轻其细胞毒性(均P<0.01)。
　　结论:肝衰竭患者升高的胞外组蛋白对肝组织细胞具有损伤作用,且在一定程度上受抗组蛋白抗体及(或)APC的抑制。

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1 引言

2 材料与方法

2.1 研究对象

2.2 主要实验试剂

2.3 主要实验耗材和设备

2.4 主要溶液的配置

2.5 实验方法

2.6 统计学分析

3 结果

3.1 肝衰竭患者肝组织变化

3.2 肝衰竭患者胞外组蛋白水平及其与肝损害的关系

3.3 用肝衰竭患者血清或 L-02 人肝细胞裂解上清液来源的组蛋白（H3/H4）、上清液+抗H3与抗H4抗体分别处理培养的肝细胞与内皮细胞的效应

3.4 组蛋白对培养肝细胞[Ca2+]i与Caspase-3活性的影响

3.5 APC减轻胞外组蛋白细胞毒性作用

4 讨论

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述