人脐带间充质干细胞对放射线照射后人胚肺成纤维细胞中经典Wnt/β-catenin通路影响的研究

摘要

目的:1.体外建立人胚肺成纤维细胞（HELF）放射性损伤模型，观察 X射线照射前后人胚肺成纤维细胞变化以及不同照射剂量下人胚肺纤维细胞的增殖活力，筛选人胚肺成纤维细胞体外研究的最适照射剂量。2.观察人脐带间充质干细胞（hUC-MSCs）对X射线照射后人胚肺成纤维细胞Wnt/β-catenin通路中关键信号因子的影响，探讨hUC-MSCs治疗放射性肺损伤的可能机制。
　　方法:体外组织块贴壁培养法培养原代hUC-MSCs并传代，扩增细胞。HELF分别经直线加速器0Gy、5Gy、8Gy X线照射后，MTT比色法检测其增殖活性。HELF分为A组（照射组）、B组（共培养组）和C组（正常对照组），A组和B组经5Gy X射线照射后，B组与hUC-MSCs通过Transwell系统非接触共培养。照射36h后，免疫荧光检测HELFα-SMA表达；照射12h、24h、36h后Western blot检测HELF总蛋白中α-SMA、GSK-3β、p-GSK-3β、FRAT1的蛋白表达和胞核内β-catenin蛋白表达；Real time PCR检测正常和A组hUC-MSCs第36h SFRP-1 mRNA表达。ELISA法检测细胞培养液中SFRP-1、WISP-1蛋白表达。
　　结果:组织块贴壁法培养出原代hUC-MSCs,获取大量细胞。直线加速器 X线5Gy照射剂量可使HELF增殖活力增强，较0Gy、8Gy增殖曲线明显。免疫荧光检测HELFα-SMA表达，A组较C组表达强烈，而B组较A组表达减弱。Western blot检测α-SMA、p-GSK-3β、p-GSK-3β/GSK-3β和胞核内β-catenin蛋白表达，A组较C组升高，而B组较A组下降的同时，FRAT1表达也明显下降；ELISA检测培养液中WISP-1，发现A组较C组升高，B组较A组下降。ELISA检测B组培养液中SFRP-1较A组、C组各时间点均显著升高。Real time PCR检测B组第36h的hUC-MSCs中SFRP-1 mRNA表达明显高于正常hUC-MSCs。
　　结论:体外直线加速器5Gy X线照射剂量可增强HELF增殖活力，成功制造放射性肺损伤HELF模型；hUC-MSCs可能通过抑制HELF中经典Wnt/β-catenin通路的活化而影响肺成纤维细胞的分化,为放射性肺纤维化的治疗提供潜在的靶点。

目录

封面

声明

目录

英文缩略词对照表

中文摘要

英文摘要

1前言

2材料与方法

3 结 果

4讨论

5 结论

6 创新

7 不足之处

8 下一步研究方向

参考文献

附录

致谢

综述: Wnt/β-catenin信号转导通路与肺纤维化的关系