不同剂量的雌激素对大鼠子宫内膜损伤后修复的影响

摘要

目的：宫腔粘连(Intrauterine adhesion, IUA)是已成为育龄女性继发不孕常见原因之一。目前对于IUA的形成机制仍不清楚，且尚无有效的治疗手段。宫腔操作术后特别是刮宫术后预防IUA的发生具有重要意义，预防IUA及IUA术后再发生成为学界的研究热点。虽然雌激素相关制剂在人工流产术后干预被普遍应用，但是其对预防IUA形成的效果以及使用剂量等仍存在争议。本课题小组前期已成功建立稳定的大鼠宫腔粘连动物模型，为研究提供良好的平台。本研究期望在此动物实验模型基础上，采用芳香化酶抑制剂(来曲唑)阻断体内雌激素的合成，在消除内源性雌激素的基础上，添加不同剂量的外源性雌激素，对雌激素预防宫腔粘连形成的效应方面进行初步研究，包括雌激素干预后对7天的近期组织效应观察，以及对受精卵着床后的远期内膜容受性的功能效应观察。
　　方法：(1)不同剂量的雌激素干预大鼠宫腔粘连的近期效应观察：通过常规阴道涂片选择动情期Wistar大鼠，随机分为5组。除正常对照组(Control组，C组)外，余4组均采用自制微型刮勺模拟机械刮宫术，且均为左侧子宫损伤处理，右侧不予处理。根据不同观察需求，余4组分为损伤组(Damage组，D组)、损伤+来曲唑组(Damage+Letrozole组，DL组)、损伤+来曲唑+10μg雌激素组
　　(Damage+Letrozole+10μgE2组，DL-10组)、损伤+来曲唑+100μg雌激素组
　　(Damage+Letrozole+100μgE2组，DL-100组)。于术前，术后3天、5天以及处死前收集各组大鼠血清待测。所有大鼠于术后7天下午四时断颈处死，立即取材，收集子宫标本。常规石蜡包埋切片后HE染色、及免疫组化检测组织修复相关因子在子宫内膜中的表达。(2)不同剂量的雌激素预防大鼠宫腔粘连的远期效应观察：将动情期Wistar大鼠随机分为4组，分别为正常对照组(Control组，C组)、损伤组(Damage组，D组)、损伤+10μg雌激素组(Damage+10μgE2组，D-10组)、损伤+100μg雌激素组(Damage+100μgE2组，D-100组)。损伤及雌激素干预同前。在雌激素干预后21天予雌雄鼠交配，于孕5.5天及孕7天处死后取材。常规石蜡包埋切片后行HE染色及免疫组化检测容受相关在子宫内膜中的表达。
　　结果：(1)本实验在大鼠宫腔粘连模型基础上，使用芳香化酶抑制剂和外源性雌激素添加对模型进行干预。从HE组织形态染色及粘连相关因子、血管生成相关因子、炎性相关因子、增殖细胞等方面观察，随着体内雌激素水平的升高，子宫内膜纤维化面积有所缩小，有统计学差异(P<.05)。但在高雌激素环境下，大鼠子宫内膜腺上皮呈现不同程度的鳞状上皮化生。(2)大鼠子宫内膜损伤给予不同剂量的雌激素干预后对内膜容受的效应观察，C组和D-10组雌激素组腺体丰富，实质细胞多， D组和D-100组腺体数目明显减少，实质细胞减少。损伤各组与C组比较，内膜αvβ3、LIF表达量显著下降(P<.05)；D-10组与D组、D-100组比较，αvβ3、LIF表达量显著增多(P<.05)；D组与D-100组比较，αvβ3表达量相当(P>.05)，而LIF表达量下降(P<.05)。与C组及各组自身对照侧比较，损伤各组损伤侧着床点个数显著减少(P<.05)；损伤各组间比较，D-10组着床个数较D组、D-100组稍增多， D-100组与D组比较，着床个数略增加，均无显著性差异。
　　结论：(1)提示雌激素可在一定程度预防子宫腔粘连，降低内膜纤维化的发生率，但是高雌激素的使用会带来高风险及副作用；(2)雌激素干预可在一定程度上促进子宫内膜修复，改善子宫内膜容受功能，其中10μg剂量(相当于大鼠生理剂量)效果最佳，大剂量的雌激素可能导致子宫内膜容受性的下降。

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第1章 不同剂量的雌激素对大鼠子宫内膜损伤修复的近期影响

1 引言

2 材料与方法

2.1实验动物

2.2试剂及配制

2.3实验方法

2.4统计学处理

3 结果

3.1大鼠子宫模拟刮宫术后大体形态学观察结果

3.2各实验组常规HE染色结果

3.3各组大鼠血清雌二醇、孕酮水平结果

3.4细胞因子在各组大鼠子宫内膜中的表达结果

4 讨论

第2章 不同剂量的雌激素对大鼠子宫内膜损伤修复的远期影响

1 引言

2 材料与方法

2.1实验动物

2.2试剂及配制

2.3实验方法

3 结果

3.1孕5.5 d子宫内膜组织HE染色结果

3.2孕5.5 d血清雌二醇、孕酮水平结果比较

3.3子宫内膜组织免疫组化染色结果

3.4孕7 d胚胎着床点情况

4 讨论

第三章 结论

结论

创新之处

不足及下一步实验

参考文献

附录

本人简历

在校期间研究成果目录

致谢

综述:雌激素对组织损伤修复影响的研究进展