IL-1β促进肺鳞癌SK-MES-1细胞增殖和迁移的作用及机制的研究

摘要

背景：肺癌是是临床上最为常见的恶性肿瘤之一，发病率和死亡率呈上升趋势，目前死亡率已是全世界范围内恶性肿瘤的首位。肺鳞癌作为肺癌的重要组织学类型，对其的研究成果却非常稀少。越来越多的研究报道证实肿瘤的发生发展与慢性炎症相关,炎症不仅可以增加癌变的概率还可促进肿瘤的进展和演进。IL-1β是炎症反应的中心介质，已有文献报道证实IL-1β对肿瘤发生发展的促进作用。miRNAs是体内参与负性调控的非编码小RNA,通过影响编靶基因的表达来广泛参与机体各项生命活动。研究发现烟雾暴露后在肺部形成的炎性环境使得大鼠和人肺组织中miR-223表达降低。但炎症因子IL-1β与肺鳞癌发生发展的关系以及是否有miR-223参与调控都还不清楚。因此，本研究通过体外模拟肺鳞癌细胞生长的炎性环境来探索炎症因子IL-1β对肺鳞癌生物学影响及机制，为肿瘤的早期预防和治疗提供新的突破点。
　　目的：（1）探索IL-1β对肺鳞癌细胞增殖和迁移的影响
　　（2）揭示IL-1β影响肺鳞癌生物学的具体机制
　　方法：（1）通过平板克隆实验观察不同浓度IL-1β对SK-MES-1细胞增殖的影响。（2）通过划痕实验和Transwell小室实验观察IL-1β对SK-MES-1细胞迁移能力的影响。
　　（3）通过荧光定量PCR检测不同浓度IL-1β对miR-223表达情况的影响。
　　（4）瞬时转染miR-223的mimics、mimics-NC、inbihitor、inbihitor-NC到SK-MES-1细胞。通过CCK8来检测miR-223对肺鳞癌增殖的影响以及划痕实验检测其对肺鳞癌细胞迁移的影响。
　　（5）检测过表达或者下调miR-223后COX2的表达以及IL-1β处理后COX2的表达。
　　（6）细胞免疫荧光方法检测IL-1β以及PDTC处理后NF-кB的组分P65蛋白的核转位情况。
　　（7）荧光定量PCR检测NF-кB通路阻断剂PDTC对miR-223表达的影响。
　　结果：（1）炎症因子IL-1β能够促进肺鳞癌细胞增殖和克隆的形成，呈现浓度依赖性，在1ng/ml时效果最显著，但当浓度大于1ng/ml时这种促进作用减弱。
　　（2）划痕实验和Transwell实验结果均显示IL-1β增强肺鳞癌细胞的迁移能力。（3）IL-1β处理肺鳞癌细胞后miR-223表达下调，呈现时间和浓度依赖性。
　　（4）miR-223抑制肺鳞癌SK-MES-1细胞的增殖和迁移，在肺鳞癌中扮演抑癌基因角色。
　　（5）miR-223负性调控COX2的表达，且IL-1β作用后COX2的表达增加。
　　（6）IL-1β激活肺鳞癌SK-MES-1细胞中的NF-кB途径，促进P65蛋白转位进入细胞核内，而这种效应可以被PDTC阻断。
　　（7）IL-1β下调肺鳞癌细胞中miR-223的表达依赖于NF-кB信号途径。
　　结论：IL-1β能够激活NF-кB信号通路下调SK-MES-1细胞中miR-223表达,使得其靶基因COX2表达增加来促进肺鳞癌的增殖和迁移。IL-1β/NF-кB/miR-223/COX2调控轴为探究炎症与肺鳞癌的关系及其分子机制提供新的视角，也可能为炎症相关肿瘤发病机制的研究和治疗提供新的思路。

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英文缩略语

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1 前言

2 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.2 试验方法

2.3 统计分析

3 结果

3.1 IL-1β促进肺鳞癌细胞SK-MES-1细胞克隆形成

3.2 IL-1β加速肺鳞癌细胞的迁移

3.3 IL-1β下调肺鳞癌SK-MES-1细胞中miR-223的表达

3.4 miRNA-223抑制SK-MES-1细胞的增殖和迁移

3.5 miRNA-223调控靶基因COX2的表达

3.6 炎症因子IL-β增强SK-MES-1细胞COX2的表达

3. 7 IL-1β依赖于NF-кB信号途径来调节肺鳞癌细胞miR-223的表达

4 讨论

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述:IL-1β对肿瘤生物学影响的研究进展