EPO/EPOR信号通路对成体脊髓神经干细胞分化作用的实验研究

摘要

目的：
　　取成年SD大鼠脊髓细胞，原代培养后取第3代NSCs做为研究对象，在体外条件下加入重组人促红细胞生成素（rhEPO），研究促红细胞生成素（EPO）及其受体（EPOR）信号通路对大鼠成体脊髓神经干细胞（NSCs）分化的影响。
　　方法：
　　①实验对象：取成年SD大鼠脊髓细胞，在培养基DMEM/F12中进行培养，培养至第3代NSCs，选取其做为研究对象；
　　②对培养的成体脊髓NSCs进行BrdU与Nestin的双标记染色，以对NSCs进行鉴定；
　　③实验分组：分为两组，在实验组的培养液中再加入重组人促红细胞生成素（rhEPO），同时在培养液中滴加等体积生理盐水作为对照组；
　　④采用免疫荧光染色方法对各组NSCs上EPOR蛋白表达情况进行检测；
　　⑤使用Western Blot法对各组NSCs上EPOR蛋白表达情况进行检测；
　　⑥采用免疫细胞化学法分别观测两分组的NSCs的分化现象。
　　结果：
　　①培养7d后，在镜下可见圆形的神经球形态，经形态学及免疫化学鉴定，鉴定其为成体NSCs；
　　②培养的成体NSCs在体外可分化为神经元及星型胶质细胞；
　　③免疫荧光染色结果显示实验组与对照组NSCs中均有EPOR蛋白表达，实验组较对照组增强；
　　④蛋白免疫印迹结果显示实验组EPOR蛋白表达水平较对照组增高，差异有统计学意义（P<0.01）；
　　⑤免疫荧光染色法观测到实验组NSCs分化为神经元的比例高于对照组，差异有显著性（P<0.01）。
　　结论：
　　重组人促红细胞生成素（rhEPO）能激活EPO/EPOR信号通路，从而提高成体脊髓NSCs向神经元分化的能力。

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英文缩略词对照表

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英文摘要

1 前言

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 方法

2.3 统计学分析

3 结果

3.1 成体脊髓NSCs分离、培养与鉴定

3.2 NSCs及其EPOR的免疫荧光观测

3.3 NSCs中EPOR蛋白表达Western blot结果

3.4 NSCs分化实验与神经元数目比值计算结果

4 讨论

5 结论

参考文献

附录

致谢

综述: 促红细胞生成素神经保护机制的研究进展