FTY720与人脐带间充质干细胞协同治疗内毒素所致小鼠急性肺损伤的实验研究

摘要

目的:急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征(acute lung injury/acute respiratory distress syndrome, ALI/ARDS)是临床危重症患者高发病率和死亡率的主要原因，因缺乏有效的治疗药物，所以亟待寻找新的治疗手段。近年研究发现人脐带间充质干细胞(Human Umbilical Cord-Mesenchymal Stem Cells, hUC-MSCs)可以有效缓解急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征，而1-磷酸鞘氨醇(sphingosine-1-phosphate,S1P)对增强血管内皮细胞屏障功能具有重要作用，可抵抗肺脏的炎症反应，减轻肺损伤。FTY720为其类似物，是修饰后化学合成物，也是S1P1激动剂，具有免疫抑制作用，有研究结果表明，小剂量的S1P1激动剂对于小鼠急性肺损伤有保护作用。因此我们根据其各自功能及特点，推测hUC-MSCs与FTY720之间在治疗ALI/ARDS中有协同性。本实验研究的目的是探讨hUC-MSCs与FTY720治疗内毒素所致急性肺损伤的协同作用，以期增加治疗效果，并减少各自的治疗缺憾，同时对其治疗机理进行初步研究。
　　方法:将8-10周龄雌性 C57BL/6小鼠随机分为5组，分别是正常组、LPS组、hUC-MSCs组、FTY720组、hUC-MSCs与FTY720联合给药组。正常组给予气管内滴注NS，其余各组滴注10 mg/kg内毒素制备小鼠急性肺损伤模型，模型建立后24 h，分别给 hUC-MSCs组每只小鼠尾静脉注射2×105人脐带间充质干细胞，给FTY720组每只小鼠腹腔内注射剂量为0.1 mg/kg的 FTY720，联合给药组给予尾静脉注射2×105人脐带间充质干细胞和腹腔内注射剂量为0.1 mg/kg的 FTY720。分别于造模后48 h及7 d处死小鼠，观察各组肺组织病理变化（HE染色）和病理损伤评分、肺组织湿干重比值、肺 Micro-CT(活体)、BALF总蛋白和炎症因子（IL-12p70、IL-10、 IL-6、MCP-1、IFN-γ、TNF-α）含量在给药后48小时和7天分别测得，48小时后分析各组小鼠生存率。提取肺总蛋白，进行双向电泳测定，对获取的蛋白图谱进行分析，寻找差异表达的蛋白质，以观察用内毒素损伤后肺部蛋白质表达的差异。
　　结果:1.小鼠肺组织损伤评分和肺CT结果表明我们成功建立了内毒素诱导的小鼠急性肺损伤模型。2.研究发现hUC-MSCs组、FTY720组、hUC-MSCs与FTY720联合给药组的小鼠给药后生存率都有所提高、肺病理损伤评分降低、湿干重比值降低、灌洗液中总蛋白含量减少以及灌洗液中炎症因子 IL-6、TNF-α、MCP-1减少。联合给药组与单独使用hUC-MSCs或FTY720组相比，联合给药的治疗效果最好,但其中生存率和肺湿干重比值的降低并没有统计学意义。3.蛋白质双向电泳结果表明急性肺损伤小鼠的肺内蛋白量是超过正常小鼠的。蛋白质点数为(100±2)，其中有21个表达的蛋白差异点，通过蛋白质谱鉴定和生物信息检索结果显示蛋白质过氧化物酶-6在损伤肺和正常肺中有明显差异。
　　结论:气管内滴注内毒素建立急性肺损伤小鼠模型较稳定；使用 hUC-MSCs或FTY720的单独给药组可以减少肺内炎症，hUC-MSCs和 FTY720联合给药组与单独给药相比也可以通过彼此之间的相互作用有效缓解急性肺损伤；蛋白质双向电泳结果表明急性肺损伤小鼠肺组织中蛋白质过氧化物酶-6表达的增加，机制还待进一步研究。hUC-MSCs和 FTY720联合给药与分别单独给药相比也许是更优的治疗策略，其机制还有待于进一步探究。

目录

声明

缩略词表

前言

第一部分 小鼠急性肺损伤模型的制备

1.实验材料

2.实验方法

3.实验结果

4.讨 论

第二部分 FTY720与hUC-MSCs协同治疗小鼠急性肺损伤

1.实验材料

2.实验方法

3.实验结果

4.讨 论

第三部分 ALI小鼠肺组织蛋白质电泳图谱分析

1.实验材料

2.实验方法

3.实验结果

4.讨 论

小结

参考文献

个人简历

攻读学位期间发表论文

致谢

文献综述:间充质干细胞治疗急性肺损伤的研究进展