血清14-3-3η蛋白水平在类风湿关节炎及脊柱关节病中的临床意义

摘要

研究背景：
　　类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis,RA）是一种慢性持续性多发性以小关节为主的自身免疫性疾病。脊柱关节病（Spondyloarthropathy,SpA）是以强直性脊柱炎（Ankylosing Spondylitis,AS）为原型,同时可累及外周关节的炎性疾病。目前RA与SpA为临床上两种较常见的炎性关节病，早期若不及时识别及给与干预，后期均有较高的致残率，严重影响患者生活质量。因此准确的在疾病早期予以正确诊断显得尤为重要，随着疾病诊断标准的不断更新，近几年影像学如磁共振成像（MRI）亦或是超声等辅助手段在RA及SpA的诊断中已成为热点，但其实验室诊断指标仍维持原有现状，未见有新的进展，易造成部分实验室指标阴性患者的漏诊，故寻求新的实验室指标是临床医生目前所迫切需要的。
　　14-3-3蛋白是高度保守、几乎在所有真核生物细胞中都表达的蛋白质家族。主要包括7种亚型，可以与多种胞内蛋白质发挥相互作用，参与调节生物学过程。14-3-3ε蛋白为众多亚型中的一种，目前已有研究显示，14-3-3ε蛋白亚型具有配体活性，可优先激活先天免疫系统的细胞。其通过信号级联形式如细胞外信号调节激酶和p38通路上调促炎细胞因子。少量研究表明14-3-3ε蛋白参与RA的发病机制，与RA的诊断、疾病活动性及疾病预后一定相关性。并且其14-3-3蛋白自身抗体与SpA的疾病活动性以及影像学进展也有一定联系。现经文献检索关于14-3-3ε蛋白与RA的研究较少，且未见有14-3-3ε蛋白水平与SpA的相关报道。本研究旨在通过测定RA及SpA患者血清14-3-3ε蛋白水平，进一步明确14-3-3ε蛋白水平对于RA及SpA诊断以及疾病的预后作用，为RA及SpA患者的诊断及治疗提供理论依据。
　　目的：
　　探讨血清14-3-3ε蛋白水平在RA及SpA患者中的临床意义
　　方法：
　　选择2014年3月-2016年5月安徽医科大学第一附属医院风湿科250例住院的RA患者和222例SpA患者，同时于体检中心同期选择80例年龄、性别想匹配的正常人（对照组）。RA患者符合ACR1987年及2009年ACR关于RA的分类标准，SpA患者符合2010年ASAS分类标准。采用酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA）测定RA患者、SpA及对照组血清14-3-3ε浓度。详细记录RA及SpA患者各临床及实验室指标，采用双能X线骨密度仪测定RA患者（232例）股骨（股骨颈（neck）、Ward区、大转子、总股骨区）和腰椎（lumbar spine, L2、L3、L4、L2-4）部位BMD，160例SpA患者行MRI检查并进行SPARCC评分。
　　结果：
　　1.250例RA患者中有245例14-3-3ε血清蛋白水平高于正常，阳性率高达98%（245/250），SpA患者中血清14-3-3ε蛋白阳性率62%（138/222）,正常对照组阳性率最低5%（4/80）。三组间阳性率比较差异有统计学意义（x2=261.319，P<0.0001）。RA组[2.53/(1.22-5.81)]及SpA组[0.95/(0.54-2.09)]血清14-3-3ε蛋白水平明显高于正常对照组[0.20/(0.14-0.29)]，且RA组亦高于SpA组。三组间血清14-3-3ε蛋白水平比较差异有统计学意义（x2=248.694，P<0.0001）.并经调整检验水准（P=0.05/3）后三组间两两比较差异均有统计学意义。
　　2.血清14-3-3ε蛋白水平在对照组[0.20/(0.14-0.29)]、早期RA[3.75/(1.73-7.74)]及非早期RA[2.14/(1.19-4.23)]三组间比较有差异统计学意义（x2=176.799，P<0.0001），并经调整检验水准后三组间两两比较差异均有统计学意义。且早期RA中14-3-3ε蛋白水平高于非早期RA。三组间阳性率比较差异亦有统计学意义（x2=283.227，P<0.0001），但早期RA96.2%（76/79）与非早期RA98.8%（169/171）两组间阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05）。
　　3.在RA患者中，血清14-3-3ε蛋白水平在类风湿因子（rheumatoid factor, RF）阳性与阴性分组间、抗环瓜氨酸肽（anti-cyclic citrullinated peptidesantibody,抗CCP抗体）阳性与阴性组间、DAS28分组间、有无脊柱骨折组间、有无骨质疏松（osteoporosis，OP）组间以及股骨颈区（neck）、ward区、大转子、L2、L3、L4有无OP组间差异均无统计学意义（P>0.05），但OP组血清14-3-3η蛋白水平均高于无OP组。在neck、大转子、L2、L3、L4正常组、骨量减少、OP三组间差异也均无统计学意义（P>0.05）。在 ward区正常组[2.14/(1.19-03.96)]、骨量减少[2.21/(1.13-5.36)]及 OP[3.39/(1.64-8.05)]三组间差异有统计学意义（x2=9.816，P=0.007），且14-3-3ε蛋白水平梯度逐渐上升，OP组水平最高。
　　4.在RA患者14-3-3ε蛋白阳性亚组中，线性相关分析显示：血清14-3-3ε蛋白水平与VAS评分（rs=0.140, P=0.029）、HAQ评分（rs=0.136, P=0.034）呈正相关，与病程（rs=-0.149, P=0.019）、Sharp评分（rs=-0.137, P=0.047）、股骨区（neck、ward区、大转子、总股骨区）及腰椎各BMD值（L2、L3、L4、L2-4）之间呈负相关（P<0.05）。
　　5.在SpA患者中，血清14-3-3ε蛋白水平在BASDAI活动与缓解组间，ASDAScrp活动与缓解组间，SPARCC评分分组间、中轴及外周脊柱关节病组间和反射学阴性及阳性组间差异均无统计学意义（P>0.05）。
　　6.在SpA患者中，枕墙距、胸廓扩张度、腰椎活动度、指地距、VAS评分、PGA、BASFI功能评分、BASDAI1、BASDAI2、BASDAI3、BASDAI4、BASDAI5、BASDAI6、BASDAI总、ASDAScrp、SPARCC评分、ESR、CRP在血清14-3-3ε蛋白阳性与阴性分组间差异均无统计学意义（P>0.05）。
　　7.在SpA患者14-3-3ε蛋白阳性亚组中，线性相关分析显示：14-3-3ε蛋白与病程（rs=0.390, P<0.001）、枕墙距（rs=0.300, P=0.001）、胸廓扩张度（rs=-0.204, P=0.021）、腰椎活动度（rs=-0.176, P=0.046）、SPARCC评分（rs=-0.354, P<0.001）、SPARCC1（rs=-0.340, P=0.001）、SPARCC2（rs=-0.235, P=0.019）、SPARCC3（rs=-0.298, P=0.003）均呈正直线相关。
　　8.222例SpA患者中有48例进行了治疗前后的对比，14-3-3ε蛋白治疗后相比治疗前血清水平明显降低[0.80/(0.55-1.51)] VS[1.06/(0.54-2.60)]，非参数配对比较两组间差异有统计学意义（z=-2.413，P=0.016）。
　　9.以血清14-3-3ε蛋白为检验变量，RA组（1=RA组，0=正常对照组）或SpA组（1=SpA组，0=正常对照组）分别为效应变量。RA组ROC曲线显示：血清14-3-3ε蛋白截点值为0.892ng/ml时，灵敏度为96.8%，特异度为97.5%（AUC=0.987，P<0.001）。SpA组ROC曲线显示：血清14-3-3ε蛋白截点值为0.447ng/ml时，灵敏度为86.9%，特异度为92.5%（AUC=0.935，P<0.001）。
　　结论：
　　1.14-3-3η蛋白在RA组及SpA组的血清水平明显高于对照组，且其在RA及SpA组阳性率明显高于对照组，14-3-3η蛋白可作为正常人与炎性关节病的鉴别指标。
　　2.14-3-3η蛋白与RA的临床症状、疾病活动性及骨质疏松的发生密切相关。
　　3.14-3-3η蛋白水平变化可作用SpA疗效评价之一。

目录

声明

中英文缩略词表

1 引言

2 材料与方法

2.1 入组标准

2.2 临床资料记录

2.3 Sharp评分[6]

2.4 SPARCC评分

2.5 BMD测定和骨质疏松（osteoporosis，OP）判断标准[8]

2.6 实验材料

2.7 实验标本收集

2.8 实验原理

2.9 操作步骤

2.10 健康问卷调查

2.11 RA关节疾病活动评分DAS28

2.12 统计学方法

3 结果

3.1 血清14-3-3η蛋白水平在对照组、RA患者及SpA患者三组中的比较

3.2 血清14-3-3η蛋白水平在对照组、早期RA及非早期RA三组间的比较

3.3 血清14-3-3η蛋白水平在RA各指标分组间的比较

3.4 RA患者中血清14-3-3η蛋白阳性亚组与各临床及实验室指标间的相关性

3.5 血清14-3-3η蛋白在SpA各指标分组间的比较

3.6 SpA患者各临床及实验室指标在血清14-3-3η蛋白分组间的比较

3.7 SpA患者中血清14-3-3η蛋白阳性亚组与各临床及实验室指标间的相关性

3.8 SpA患者治疗前后14-3-3η蛋白水平的比较

3.9 血清14-3-3η蛋白的ROC曲线分析

4 讨论

4.1 14-3-3-蛋白的概述

4.2 血清14-3-3η蛋白水平在RA患者的变化

4.3 血清14-3-3η蛋白水平与RA患者疾病活动性的关系

4.4 血清14-3-3η蛋白与RA患者OP间的联系

4.5 血清14-3-3η蛋白与SpA之间的联系

5 结论

参考文献

附录个人简历

致谢

综述:信号蛋白14-3-3在炎性关节病中的研究进展