rhEPO对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠海马CA1区NMDA受体NRI亚单位的表达及青春期焦虑行为和学习记忆的影响

摘要

目的：
　　探讨重组人促红细胞生成素对于新生大鼠缺氧缺血性脑损伤受损侧海马CA1区NMDA受体NRI亚单位的表达及青春期焦虑行为、学习记忆能力的影响。
　　方法：
　　把7日龄120只 Wistar大鼠按随机数字表随机分成对照组、HIBD组、HIBD+rhEPO组，每组均为40只。采用改良的Rice方法制备新生大鼠的HIBD动物模型，术后让大鼠休息1小时后，把新生大鼠置放在含92%氮气和8%氧气的缺氧舱中，让大鼠持续缺氧2h。对照组的处理是：仅游离大鼠的右侧颈总动脉，但不结扎颈总动脉，缝合皮肤后不予缺氧。HIBD+rhEPO组的处理是：在大鼠缺氧缺血后，立即腹腔内注射 rhEPO，药物剂量为5000U/Kg。HIBD组与对照组在缺氧缺血后立即腹腔内注射与rhEPO体积相等的生理盐水。在所有实验大鼠中，按随机数字表给每组随机选择24只大鼠分别在术后3、12、24、48h四个时间点取大鼠的脑组织标本，并且采用免疫组织化学的染色方法检测三组大鼠在四个不同时点海马CA1区NMDA受体NRI亚单位的表达。每组12只大鼠再分别于35d、49d、63d三个时点完成青春期焦虑行为的实验研究。每组4只大鼠于35d完成青春期学习记忆能力的实验研究。
　　结果：
　　1体重生长发育情况
　　术前三组实验大鼠的体重比较结果无差异统计学意义(P>0.05)。从术后到实验结束，各组实验大鼠每日测量体重。术后24h HIBD组的大鼠，体重比手术前有所下降，HIBD组体重明显低于对照组和治疗组，HIBD组与对照组和治疗组比较结果有差异统计学意义（P＜0.05）。术后48h HIBD组实验大鼠的体重开始出现缓慢的增长，HIBD组各个时间点的体重均比对照组和治疗组的大鼠偏低。直至实验大鼠生后63d，HIBD组实验大鼠的体重仍然明显比照组和治疗组低，比较结果有差异统计学意义（P＜0.05）。在各个时间段点，对照组实验大鼠体重和治疗组实验大鼠体重比较，均无差异统计学意义（P＞0.05）。
　　2免疫组织化学染色
　　HIBD组右侧海马CA1区NR1阳性细胞数比较于HI后3h后开始出现升高，与对照组和治疗组比较，比较结果的差异有统计学意义（P＜0.05），HIBD组右侧海马CA1区NR1阳性细胞数比较于HI后12h明显升高，于HI后24h达高峰，3h、12h、24h、48h四个时点右侧受损海马CA1区NR1阳性细胞数与对照组、治疗组比较，都高于对照组，比较结果的差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗组3h、12h、24h，48h各时点右侧海马CA1区NR1阳性细胞数低于HIBD组，但高于对照组，三组间结果的比较，都有差异统计学意义（P＜0.05）。HIBD组右侧海马CA1区NR1阳性细胞数比较于HI后48h明显降低，与对照组和治疗组比较，比较结果的差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　3焦虑行为
　　①高架十字迷宫实验
　　P35、P49、P63时三组间入臂总次数比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。HIBD组进入开放臂次数的百分比明显低于对照组和治疗组，差异有统计学意义（P＜0.05），对照组与治疗组进入开放臂次数的百分比的比较结果的差异无统计学意义（P＞0.05），HIBD组进入开放臂滞留时间的百分比明显低于对照组和治疗组，差异有统计学意义（P＜0.05），对照组与治疗组进入开放臂滞留时间的百分比无明显差异，差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　②开场实验
　　P35、P49、P63时三组实验大鼠5分钟内水平运动总距离的相互比较结果的差异不明显，差异均无统计学意义（P＞0.05）。HIBD组进入中央区总次数明显少于对照组和治疗组，差异有统计学意义（P＜0.05），对照组与治疗组实验大鼠进入旷场的中央区总次数的比较结果无明显差异，差异无统计学意义（P＞0.05）；HIBD组实验大鼠在旷场中央区停留时间明显比对照组和治疗组低，有明显的差异，比较结果的差异有统计学意义（P＜0.05），对照组与治疗组实验大鼠在旷场中央区停留时间的比较明显差异，比较结果的差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　4学习记忆能力
　　P35时点时，HIBD组平均逃避潜伏期时间明显长于对照组和治疗组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；治疗组实验大鼠平均逃避潜伏期较对照组长，比较结果的差异有统计学意义（P＜0.05）；P35实验大鼠在训练第6天进行穿环指数检测，HIBD组实验大鼠的穿环指数明显较对照组和治疗组低，比较结果的差异都有统计学意义（P＜0.05）；治疗组实验大鼠的穿环指数较对照组低，比较结果的差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论：
　　1.应用rhEPO干预治疗可以减少新生大鼠HIBD海马CA1区NMDA受体NRI亚单位的表达。
　　2.HIBD后Wistar大鼠在青春期焦虑情绪增加，合理应用外源性rhEPO进行干预能够使它的焦虑情绪恢复到正常水平。
　　3.HIBD后Wistar大鼠青春期学习记忆能力下降，合理应用外源性rhEPO进行干预可减轻脑损伤，改善学习记忆能力。但不能恢复至正常水平。

目录

声明

英文缩略词表

1 前言

2 材料与方法

2.1 建立Wistar大鼠HIBD模型

2.2 免疫组化染色检测海马CA1区NMDA受体亚单位I型的表达

2.3 测量大鼠的青春期焦虑行为

2.4 测量大鼠青春期学习记忆能力

2.5 统计学处理

3结果

3.1 体重的生长情况

3.2免疫组化染色

3.3焦虑行为的实验结果

3.4 Morris水迷宫测量学习记忆能力的结果

4 讨论

4.1探讨缺氧缺血模型制备的方法

4.2 缺氧缺血时谷氨酸的作用

4.3 高架十字迷宫实验和开场实验

4.4 Morris水迷宫

4.5 rhEPO对HIBD损伤侧海马CA1区后NR1表达及青春期焦虑行为的影响

4.6 rhEPO对HIBD青春期学习记忆能力的影响

4.7 展望

5 结论

参考文献

附录个人简历

致谢

综述:床边超声技术在新生儿脑损伤中的应用