Sp1和Ⅰ型胶原在豚鼠实验性近视巩膜重塑中的表达及其相关性研究

摘要

目的：研究近视巩膜重塑中Sp1作为TGF-β1下游信号转录基因的表达情况。探讨Sp1蛋白分子及mRNA的表达与实验性形觉剥夺性近视（form deprived myopia，FDM）之间的关系。以期揭示TGF-β1-Sp1-CollagenⅠ信号途径在近视巩膜胶原重塑中的作用。
　　方法：选取出生1周左右的健康三色豚鼠75只，利用6号半透明乳胶气球作为眼罩遮盖豚鼠的眼睛以诱导形觉剥夺性近视动物模型。将75只豚鼠随机分为正常对照组（50眼）、形觉剥夺（FDM组，50眼）组和自身对照组（50眼），正常对照组是未做任何处理的豚鼠，FDM组是实验组的豚鼠遮盖眼，自身对照组是实验组豚鼠的暴露眼，方法是使用半透明的乳胶气球，依据豚鼠的头部形状制作成头套，遮盖豚鼠的左眼，暴露其右眼、口鼻及双耳。这种方法具有稳定、无害、不会对角膜产生压力和温度变化等诸多的优势。分别测量记录实验豚鼠在未遮盖前（0周）、遮盖2周、4周、6周及遮盖4周去遮盖1周（4/-1周）时的双眼屈光度及眼轴长度。采用免疫组织化学技术、RT-PCR法检测豚鼠正视眼和实验性近视眼巩膜中分别在遮盖0周、2周、4周、6周及诱导4周去诱导1周时间段内SP1的动态表达变化以及与Ⅰ型胶原合成与表达的变化关系。
　　结果：形觉剥夺组（FDM组）由遮盖前（0周）的远视眼（+2.09±0.31）D到遮盖2周（-1.23±0.69)D、4周(-4.17±0.59)D、遮盖4周去遮盖1周(-4.30±0.58)D及遮盖6周(-7.07±0.56)D后逐渐变成近视眼,且随着时间延长，近视度数不断加深，眼轴也逐渐延长[遮盖前眼轴长：(5.93±0.39)mm；2周时眼轴长：(6.62±0.36)mm；4周时眼轴长：(7.30±0.34)mm；4周去1周眼轴长:(7.41±0.36)mm；6周时眼轴长：(7.99±0.32)mm,P<0.05]。免疫组化结果显示，形觉剥夺（FDM）组巩膜有Sp1阳性表达，其表达均弱于两组对照组，且随着遮盖时间的延长，Sp1的阳性表达在不断减弱（p<0.05）。RT-PCR结果认为，和两组对照组相比，形觉剥夺组Sp1的mRNA表达均下调（p<0.05），且随着时间的延长，mRNA的表达也在逐渐下调（p<0.05）。
　　结论：Sp1是TGF-β1的下游信号转录基因，且在豚鼠巩膜内表达。TGF-β1可能通过Sp1信号转录途径调控Ⅰ型胶原的合成与降解，从而在近视巩膜重塑中发挥重要作用。但其具体机制还有待进一步研究。

目录

声明

英文缩略词表（Acronyms table）

1前言

2材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.3统计学方法

3 结果

3.1 眼球屈光度

3.2 眼轴长度

3.3 FDM组屈光度与眼轴长度之间的相关性分析

3.4 免疫组织化学染色

3.5 RT-PCR法

4讨论

4.1 FDM动物模型的建立

4.2 TGF-β

4.3 胶原纤维在近视巩膜中的表达

4.4 Sp1

5结论

参考文献

附录

致谢

综述:青少年近视发生发展的影响因素及其防控的研究进展