治疗脊髓损伤的中药复方物效基础研究

摘要

脊髓损伤（spinalcordinjury，SCI）的发病率随着时代的进步节节攀升，2002年北京地区脊髓损伤的发病率为60/百万人口，而这一数据在20世纪80年代仅为6.8/百万人口。该疾病主要侵害青壮年，治疗以及护理所需花费极大，且致残率和致死率居高不下，超过50％的患者表现为截瘫，已成为现代社会一个亟待解决的医学问题。然而针对脊髓损伤，全世界范围内目前并没有真正行之有效的治疗方法，只有损伤早期大剂量应用甲基强的松龙的疗效得到了肯定。然而此疗法会产生一系列副作用，同时也有文献指出此方法是否真正有效还值得商榷。造成此种“无药可医”现状背后的原因是脊髓损伤极其复杂的损伤机制。除了损伤早期的“原发性机械损伤”外，损伤之后脊髓受损部位还会发生一系列复杂的病理生理反应和生化反应，称为“继发性损伤”。继发性损伤涉及微循环障碍，局部电解质紊乱，脂质过氧化反应，炎症，细胞凋亡，胶质瘢痕形成等诸多方面，而目前的治疗主要针对其中一个到两个机制对症治疗，收效甚微。　　祖国传统中药复方成分复杂，针对脊髓损伤复杂的损伤机制，多管齐下，同时中药价格低廉，副作用小，而且已有文献证实了部分中药及其有效成分的疗效。所以开展治疗脊髓损伤的中药复方物效基础研究将是本领域的重要方向。　　第一部分复方组成的药学基础研究　　目的：按照分子中药学和方证组方理论，探讨治疗脊髓损伤的中药复方的组成及其物效基础，为研制脊髓损伤治疗药物提供理论支持。　　方法：查阅文献，复习相关中医中药基础理论，筛选相关中药。将备选中药按照方证组方理论分组，分别行水煎煮和乙醇回流提取，用TLC和HPLC方法检测其物效成分含量的变化趋势。　　结果：①选择丹参，三七，川芎为备选中药。②总体而言，醇提取物中有效成分提取率普遍高于水提取物。③三七对丹酚酸B的提取率在水提取物中影响不大，在醇提取物中可使其升高28.35％；川芎对丹酚酸B的提取率影响不大；三七+川芎对丹酚酸B的提取率在水提取物中影响不大，在醇提取物中可使其升高23.69％；④水提取物中几乎不含丹参酮ⅡА；三七可使丹参酮ⅡА的提取率升高16.66％；川芎可使丹参酮ⅡА的提取率降低57.34％；三七可以减轻川芎对丹参酮ⅡА提取率的降低程度，即丹参与川芎共同提取，加入三七后，丹参酮ⅡА提取率增加了54.97％；⑤丹参使阿魏酸的提取率在水中提物和醇提物中分别升高116.91％和64.73％；三七使阿魏酸的提取率在水中提物和醇提物中分别升高381.94％和171.84％；丹参+三七使阿魏酸的提取率在水中提物和醇提物中分别升高255.25％和82.56％；⑥丹参可使三七皂苷R1在水提取物中的提取率降低38.52％，在醇提取物中影响不大；川芎可使三七皂苷R1在水提取物中的提取率升高128.79％，在醇提取物中影响不大；丹参+川芎对三七皂苷R1在水提取物中的提取率影响不大，可使其在醇提取物中升高95.38％；⑦丹参可使人参皂苷Rg1在水提取物中的提取率降低150.49％，在醇提取物中的提取率升高20.57％；川芎可使人参皂苷Rg1在水提取物中的提取率升高45.38％，在醇提取物中的提取率降低50.52％；丹参+三七可使人参皂苷Rg1在水、醇提取物中的提取率分别降低40.33％和17.69％；⑧丹参可使人参皂苷Rb1在水提取物中的提取率降低53.78％，在醇提取物中的提取率升高59.13％；川芎可使人参皂苷Rb1在水提取物中的提取率升高44.31％，在醇提取物中的提取率降低48.25％；丹参+三七可使人参皂苷Rb1在水提取物中的提取率降低50.75％，在醇提取物中的提取率升高17.39％。　　结论：①选择丹参，三七，川芎为候选中药；②推荐“丹参+三七+川芎”采用乙醇提取方法可获得中药组方中活血化瘀类物效成分最大效率。　　第二部分中药复方及其提取物对大鼠急性脊髓损伤的药效学研究　　目的：根据实验一获得的中药组方，进一步评价其对大鼠急性脊髓损伤的治疗作用。　　方法：132只雌性SD大鼠，随机分成丹参组，三七组，川芎组，丹参+三七+川芎组，对照组，假手术组等6组，每组22只。各给药组先行灌胃给药10d,每天一次，然后采用Allen’s打击法造模，造模成功后继续灌胃直至处死，分别于造模后1d，3d，5d，1w，2w，4w，6w，8w行BBB评分，评价大鼠运动功能恢复等情况。分别对1w，2w，4w，8w组大鼠脊髓组织行HE染色检查其病理变化（每组4只），用免疫组化方法检查脊髓损伤后4W各组GFAP在损伤脊髓组织内的表达变化（每组4只）。用ELISA方法检测损伤后72小时脊髓组织匀浆caspase-3、IL-1β、IL-10的含量，分别检测血清和脊髓组织匀浆SOD、MDA、和iNOS含量（每组6只）。　　结果：血清SOD各给药组较对照组增高（P<0.05），血清MDA、iNOS各给药组较对照组降低（P<0.05），其余各指标给药组较对照组未见统计学差异。　　结论：在目前的组方及提取条件下，各给药组脊髓功能恢复并未表现出优于对照组。

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缩略语表

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前言

文 献 回 顾

1 脊髓损伤的机制

2 中药治疗脊髓损伤

3 动物模型

4 总结

正文

第一部分 复方组成的药学基础研究

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 各组方剂对大鼠急性脊髓损伤的药效学实验

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

小结

参考文献

个人简历和研究成果

致谢