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摘要
Abstract
前言
实验一 DEHP导致大鼠体内产生肝脏组织功能紊乱及免疫系统T细胞亚群的变化
1材料和方法
1.1动物
1.2试剂
1.3仪器与设备
2. 实验方法
2.1实验动物分组
2.2大鼠整体指标的测定
2.2.1组织样本收集
2.2.2石蜡切片的制备
2.2.3用组织切片做HE染色
2.2.4用组织切片做免疫组化实验
2.3生理生化指标测定
2.3.1肝指数的测定
2.3.2血清ALT、AST测定
2.3.3肝匀浆SOD和MDA 测定(硫代巴比妥酸法)
2.3.4脾脏指数的测定
2.3.5脾脏HE染色的病理学评价标准
2.3.6脾脏辅助T细胞(CD3+CD4+)、Th1、Th17和Treg的检测
2.4 数据处理
3 实验结果
3.1 DEHP对大鼠体重和肝脏指数的影响
3.2 DEHP对肝脏的病理学影响
3.3 α-SMA在肝脏组织中表达变化
3.4 肝组织生理学指标ALT、AST的变化
3.5肝组织匀浆中MDA、SOD的水平变化
3.6 DEHP对脾脏指数的影响
3.7 DEHP对脾脏的病理学影响
3.8 DEHP对脾脏中辅助T细胞(CD3+CD4+)的影响
3.9 DEHP对脾脏T细胞亚群Th1(CD4+IFN-γ+)的影响
3.10 DEHP对脾脏T细胞亚群Th17(CD4+IL-17A+)的影响
3.11 DEHP对脾脏中T细胞亚群Treg(CD4+CD25+FOXP3+)的影响
4小结
实验二 DEHP对正常人外周血单核细胞T亚群Th1、Th2、Th17、Treg及其转录因子T-bet、GATA-3、Ror-γt和Foxp3表达的影响
1 实验材料
1.1细胞
1.1.1人外周血的来源
1.1.2主要试剂
1.1.3主要试剂的配制
1.1.4主要仪器
2实验方法
2.1人外周单核细胞的制备
2.2流式细胞仪检测细胞PBMC凋亡率
2.3流式细胞术检测T细胞亚群
2.4人PBMC RNA及cDNA的提取及检测
2.5 qPCR检测T-bet、GATA-3、Foxp3 和ROR-γt mRNA的表达水平
2.7统计学分析
3结果
3.1 DEHP 对人PBMC凋亡率的影响
3.2 DEHP对人PBMC中 Th1(CD4+ IFN-γ+)细胞亚群的影响
3.3 DEHP对人PBMC中 Th2(CD4+IL-4+)细胞亚群的影响
3.4 DEHP对人PBMC中Th17(CD4+IL-17A+)细胞亚群的影响
3.5 DEHP对人PBMC中Treg(CD4+CD25+FOXP3+)细胞亚群的影响
3.6 DEHP对人PBMC中影响T细胞亚群分化的转录因子T-bet、GATA-3、Foxp3 和ROR-γt mRNA表达的影响
4小结
5讨论
6研究创新与不足
参考文献
附录
致谢
综述