学 位 论 文
MicroRNA-203通过靶向Lipin1抑制酒精性脂肪肝中肝细胞脂质异常代谢
MicroRNA-203 inhibits Alcohol-induced Hepatic Stea
MicroRNA-203通过靶向Lipin1抑制酒精性脂肪肝中肝细胞脂质代谢
MicroRNA-203 inhibits Alcohol-induced Hepatic Stea
中英文缩写词对照
（Abbreviations）
MicroRNA-203通过靶向Lipin1抑制酒精性脂肪肝中肝细胞脂质异常代谢
MicroRNA-203 inhibits Alcohol-induced Hepatic Stea
Abstract
1.引言
2. 实验材料
2.1动物
2.2 实验细胞
2.3 药品与试剂
2.4仪器与设备
2.5溶液和试剂的配制
2.6 图像分析软件
3. 实验方法
3.1 酒精性脂肪肝模型建立
3.2肝脏组织HE染色
3.3 肝脏组织油红染色
3.4 肝脏免疫组化
3.5 慢病毒过表达miR-203载体构造及体内感染
3.6 血清ALT，AST，TG，TCH测定
3.6.1 眼球采血
3.6.2 分离血清
3.6.3 酶标仪比色法检测TG，TCH含量
3.6.4 血清ALT，AST检测
3.7 细胞培养
3.7.1 细胞复苏
3.7.2 细胞培养
3.7.2 细胞传代
3.7.3 细胞冻存
3.7.4 细胞转染
3.8 MTT法测定细胞增殖
3.9 细胞内油红染色
3.10 细胞免疫荧光
3.11 AML-12细胞总蛋白提取
3.12 细胞核蛋白提取
3.13 Western Blot
3.13.1 蛋白质电泳
3.13.2 电转移
3.13.3 免疫印迹
3.14 实时定量PCR
3.14.1组织总RNA提取
3.14.2 细胞总RNA提取
3.14.3合成cDNA
3.14.4 q-PCR测定基因表达
3.15 双荧光素酶报告实验
3.15.1 质粒转染
3.15.2 Luciferase检测
4实验结果
4.1 miR-203在酒精性脂肪肝模型中的表达
4.1.1酒精性脂肪肝小鼠模型的建立和病理变化
4.1.2 miR-203在小鼠酒精性肝脏组织和酒精刺激的AML-12细胞中的表达
4.2 体内慢病毒载体过表达miR-203对小鼠肝脏脂质代谢的影响
4.2.1 体内过表达miR-203模型的建立及验证
4.2.2 过表达miR-203对小鼠肝脏脂质代谢的影响
4.3 体外过表达miR-203对AML-12细胞脂质代谢的影响
4.3.1 体外过表达miR-203模型的建立及验证
4.3.2过表达miR-203对AML-12细胞内脂质代谢的影响
4.4 miR-203能够靶向调控LPIN1
4.5 Lipin1在酒精性脂肪肝模型中的表达
4.5.1 Lipin1在酒精性脂肪肝小鼠肝脏中的表达
4.5.2 Lipin1在酒精刺激的AML-12中的表达
4.6 沉默Lipin1对AML-12脂质代谢的影响
4.6.1 si-Lipin1沉默AML-12中内源性Lipin1的表达
4.6.2 沉默Lipin1抑制了肝细胞的脂质积累
4.7 miR-203对Lipin1亚细胞定位表达的调节作用
5 讨论
6 结论
参考文献
附录
致谢
综述
酒精性肝病的研究进展与治疗
摘要
REVIEW
The Research Progress of Alcoholic Liver Disease a
Abstract
酒精性脂肪肝
2.酒精性肝炎
3.酒精性肝硬化
4．影响酒精性肝病的因素
4.1 性别因素
4.2 年龄因素
4.3 ROS和脂质的过氧化
4.4 炎症
4.5 病原相关分子模式（PAMPs）和损伤相关分子模式（DAMPs）
5.治疗措施
参考文献
