芦花鸡鸡胚源沙门氏菌的分离鉴定及其耐药与毒力相关基因分析

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1 引 言

1.1沙门氏菌病原学特征

1.1.1 沙门氏菌的形态学特征

1.1.2 沙门氏菌的培养特性

1.1.3 沙门氏菌的血清学特性

1.1.4 沙门氏菌的致病性

1.1.5 沙门氏菌的生化特性

1.2 沙门氏菌对养殖业的危害

1.2.1沙门氏菌对动物的致病性

1.2.2沙门氏菌流行病学特点

1.3沙门氏菌病的检测方法

1.3.1沙门氏菌的微生物学诊断

1.3.2沙门氏菌的免疫学诊断

1.3.3沙门氏菌的分子生物学诊断

1.4沙门氏菌的分型方法

1.4.1沙门氏菌的多位点序列分型（MLST）

1.4.2沙门氏菌的脉冲场凝胶电泳（PFGE）

1.5 细菌的耐药性

1.5.1 灭活酶和钝化酶引起细菌耐药

1.5.2 基因突变引起细菌耐药

1.5.3细菌生物膜的改变可引起沙门氏菌产生耐药性

1.5.4 可移动基因元件引起沙门氏菌耐药

1.6 沙门氏菌的毒力基因

1.6.1毒力岛

1.6.2毒力质粒

1.6.3肠毒素

1.6.4脂多糖

1.6.5细胞毒素

1.7本研究的目的和意义

2材料和方法

2.1材料

2.1.1所用菌株

2.1.2质控菌株

2.1.3主要的仪器设备

2.1.4所需主要试剂和试剂配制

2.2方法

2.2.1样品的采集及其处理

2.2.2沙门氏菌的培养

2.2.3沙门氏菌的分离鉴定

2.2.4分离菌的纯化培养及保存

2.3血清型的鉴定

2.4 沙门氏菌的多位点序列分型（MLST）

（2）DNA 提取

（3）MLST 管家基因引物

（4）MLST 的PCR 反应程序

（5）测序及序列分析

2.5 沙门氏菌的毒力基因的检测

（1）毒力基因引物的合成

（3）PCR 反应体系

（4）毒力基因的PCR 反应程序

（5）PCR 产物的凝胶电泳

2.6沙门氏菌的药敏试验

2.7沙门氏菌耐药基因的检测以及Ⅰ类整合子检测

2.7.1提取沙门氏菌基因组DNA

2.7.2对六类耐药基因的检测

2.7.3Ⅰ类整合子的检测

3 试验结果

3.1沙门氏菌的鉴定结果

3.1.1沙门氏菌培养特性

3.1.2沙门氏菌PCR鉴定结果

3.2沙门氏菌分离结果

3.3 沙门氏菌血清型分型结果

3.4 沙门氏菌MLST分型结果

3.5 毒力基因检测结果

3.5.1沙门氏菌毒力基因PCR扩增结果

3.5.2沙门氏菌毒力基因统计分析

3.6 药敏试验结果

3.6.1沙门氏菌药敏试验初步结果

3.6.2沙门氏菌药敏试验统计分析

3.6.3沙门氏菌多重耐药情况统计分析

3.7 耐药基因的检测结果

3.8 Ⅰ类整合子及耐药基因盒的检测结果

4讨论

4.1 芦花鸡源沙门氏菌的感染情况

4.2沙门氏菌血清分型和MLST分型

4.3 沙门氏菌的毒力基因结果分析

4.4 沙门氏菌的耐药表型、耐药基因型和耐药基因盒结果分析

5结论

6创新点

参考文献

致谢

攻读学位期间发表论文情况