细胞膜阳离子结合蛋白调控马铃薯Y病毒和烟草脉带花叶病毒侵染的分子机制

目录

声明

缩略词表

1前言

1.1马铃薯Y病毒属病毒

1.1.1马铃薯Y病毒

1.1.2烟草脉带花叶病毒

1.1.3马铃薯Y病毒属病毒的基因组结构

1.2植物病毒的移动

1.2.1植物病毒移动蛋白与寄主蛋白互作

1.2.2植物病毒的移动机制的研究

1.3马铃薯Y病毒属病毒P3N-PIPO蛋白

1.3.1 P3N-PIPO的发现和鉴定

1.3.2 P3N-PIPO参与植物病毒的侵染

1.4阳离子结合蛋白PCaP1

1.5 基因编辑

1.6本研究的意义

2材料与方法

2.1试验材料

2.1.1植物材料

2.1.2主要菌株与载体

2.1.3主要试剂和仪器设备

2.2试验方法

2.2.1 PCaP1表达载体的构建

2.2.2 P3N-PIPO表达载体构建。

2.2.3植物总RNA的提取和基因扩增

2.2.4酶切连接

2.2.5大肠杆菌DH5α转化

2.2.6阳性克隆筛选

2.2.7 农杆菌转化及农杆菌浸润

2.2.8免疫共沉淀

2.2.9 TVBMV P3N-PIPO基因的原核表达及蛋白纯化

2.2.10 Pull-Down试验

2.2.11PCaP1序列分析及突变引物设计

2.2.12实时荧光定量PCR

2.2.13沉默植物体内的PCaP1

3结果与分析

3.1 TVBMV P3N-PIPO 马铃薯互作蛋白筛选

3.2沉默NtPCaP1抑制TVBMV的侵染

3.3沉默StPCaP1抑制TVBMV的侵染

3.4沉默StPCaP1抑制PVY的侵染。

3.5本氏烟中过表达SlPCaP1和StPCaP1对TVBMV侵染没有显著的影响

3.6 P3NPIPO 与马铃薯、番茄和普通烟 PCaP1 在体内互作

3.7 PCaP1 与 P3N-PIPO 互作区域的鉴定

3.8 StPCaP1 第 108 位的丝氨酸是与 P3NPIPO 互作的关键位点

4讨论

4.1 P3N-PIPO 与马铃薯、番茄和普通烟寄主蛋白 PCaP1 互作

4.2 PCaP1 参与马铃薯 Y 病毒属病毒的侵染

4.3 PCaP1 与 P3N-PIPO 互作的最小结构域与互作的关键位点

4.4单位点基因编辑可能获得新的抗病毒植株

5 结论

参 考 文献

附录 试验所需溶液配方

致谢