自噬在硫酸化银杏叶多糖体外诱导肝癌细胞凋亡中的作用研究

目录

声明

符号说明

1前言

1.1 银杏叶多糖的研究进展

1.1.1 银杏叶生物学活性的研究进展

1.1.2 多糖的研究进展

1.1.3 银杏叶多糖的研究进展

1.2 硫酸化多糖的研究进展

1.2.1 多糖的硫酸化修饰

1.2.2 硫酸化多糖的生物活性

1.3 凋亡及其分子机制研究进展

1.3.1 细胞凋亡的概述

1.3.2 细胞凋亡与肿瘤

1.4 自噬及其分子机制研究进展

1.4.1 自噬的分类

1.4.2 自噬的发生过程

1.4.3 细胞自噬相关信号通路

1.4.5 细胞自噬与肿瘤

1.5 本实验研究的目的及意义

2 材料与方法

2.1 试验材料

2.2 主要试剂

2.3 主要仪器

2.4 主要溶液及试剂配制

2.4.1 磷酸缓冲盐溶液（PBS）的配制

2.4.2硫酸化银杏叶多糖溶液配制

2.4.3 噻唑蓝（MTT）的配制

2.4.4 3-Methyladenine(3-MA)溶液配制

2.4.5 Western Blot所用试剂的配制

2.5 试验方法

2.5.1 银杏叶多糖的提取和纯化

2.5.2 硫酸化银杏叶多糖的制备

2.5.3 多糖含量的测定

2.5.4 蛋白含量的测定

2.5.5 硫酸基取代度的测定

2.5.6 细胞培养与传代

2.5.7 细胞冻存

2.5.8 细胞复苏

2.5.9 MTT法检测HepG2细胞活力

2.5.10 蛋白质印记法（Western Blot）

2.5.11 3-MA 对SGBLP 抗肿瘤作用的影响

2.6数据统计与分析

3．结果与分析

3.1 GBLP与SGBLP的理化特性

3.1.1 多糖的提取

3.1.2 总糖的含量

3.1.3 蛋白质含量

3.1.4 取代度

3.2 SGBLP对HepG2细胞活力的影响

3.3 SGBLP对HepG2细胞凋亡相关蛋白表达的影响

3.4 SGBLP对HepG2细胞自噬相关蛋白表达的影响

3.5 SGBLP对HepG2细胞自噬通路的影响

3.6 抑制自噬对SGBLP诱导HepG2细胞活力的影响

3.7 加入3-MA后，SGBLP对HepG2细胞自噬相关蛋白表达的影响

3.8 加入3-MA后，SGBLP对HepG2细胞凋亡相关蛋白表达的影响

4．讨论

4.1 GBLP的提取、纯化及硫酸化修饰方法

4.2 SGBLP对HepG2细胞活力的影响

4.3 SGBLP诱导HepG2细胞凋亡

4.4 SGBLP诱导HepG2细胞自噬的发生

4.5 调控PI3K/AKT/mTOR信号通路是SGBLP发挥作用的分子机

4.6 3-MA抑制HepG2细胞自噬后增强SGBLP抗肿瘤作用

5．结论

参考文献

致谢