声明
摘要
缩略词
第一章绪论
1．1引言
1．2环境中的硫化物
1．2．1硫化氢
1．2．2硫烷硫
1．3异养细菌的硫氧化途径
1．3．1 SQR-PDO系统
1．3．2 FCSD系统
1．3．3 Sox系统
1．4硫氧化途径中的调控因子
1．4．1 BigR(biofilm growth-associated repressor)生物膜生长相关抑制因子
1．4．2 CstR(CsoR-like sulfurtransferase repressor)类铜敏感操纵子硫转移酶抑制子
1．4．3 SqrR(sumde：quinone reductase Repressor)硫醌氧化还原酶抑制因子
1．4．4FisR(Fis family transcriptional Regulator)Fis家族转录调控因子
1．5 ArsR／SmtB家族调控因子
1．5．1 ArsR／SmtB家族来源及功能
1．5．2 ArsR／SmtB家族蛋白转录调控机制
1．5．3 ArsR／SmtB家族的新的HTH转录抑制因子亚家族
1．6本论文的研究内容和意义
第二章YedE促进多硫化物转运分析
2．1实验材料
2．1．1菌株和质粒
2．1．2本章所用引物
2．1．3试剂和试剂盒
2．1．4仪器设备
2．1．5培养基和缓冲液
2．2实验方法
2．2．2重组及突变菌株的构建
2．2．3不同来源yedE重组菌株全细胞分析实验
2．2．4不同Cys突变重组菌株全细胞分析实验
2．3结果讨论
2．3．1 yedEs在细菌中的分布分析
2．3．2 YedE1E2促进多硫化物利用分析
2．3．3 YedE1E2的关键Cys分析
2．4本章小结
第三章YedR调控yedE转录分析
3．1实验材料
3．1．1菌株和质粒
3．1．2本章所用引物
3．1．3试剂和试剂盒
3．1．4培养基和缓冲液
3．2实验方法
3．2．1敲除质粒的构建
3．2．2敲除菌株的构建
3．2．3实验菌株RNA的提取
3．2．4 cDNA的合成
3．2．5荧光定量PCR
3．2．6荧光报告菌株的构建
3．2．7报告菌株荧光检测
3．2．8不同菌株代谢外源多硫化物实验
3．2．9 YedR蛋白体外表达纯化
3．2．10凝胶迁移阻滞实验(EMSA)
3．2．11基因转录起始位点的测定(5’rapid amplification of cDNA ends，5’RACE)
3．3结果讨论
3．3．1 CpyedR所在操纵子分析
3．3．2 YedR调控yedE转录水平分析
3．3．3调控蛋白YedR的生理功能分析
3．3．4 YedR蛋白的表达纯化分析
3．3．5 YedR蛋白与目的DNA序列的特异性结合分析
3．3．6 YedR蛋白的结合位点分析
3．3．7 YedR蛋白的转录起始位点分析
3．4本章小结
第四章调控蛋白YedR转录调控过程机制分析
4．1实验材料
4．1．1菌株和质粒
4．1．2本章所用引物
4．1．3试剂和试捌盒
4．1．4培养基和缓冲液
4．2实验方法
4．2．1硫化物诱导的体外凝胶迁移实验
4．2．2硫化物诱导体内实验
4．2．3梯度浓度硫化物体内诱导实验
4．2．4异源表达CpSqr菌株构建
4．2．5含有CpSqr报告系统的荧光实验
4．2．6位点突变型菌株的构建
4．2．7突变蛋白的EMSA实验
4．2．8突变型荧光报告系统实验
4．2．9同源建模分析
4．3结果讨论
4．3．1硫化物诱导的体外实验分析
4．3．2硫化物诱导的体内实验分析
4．3．3梯度浓度硫化物诱导实验分析
4．3．4内源硫化物诱导实验分析
4．3．5 YedR蛋白的关键Cys位点分析
4．3．6 YedR蛋白的同源建模分析
4．3．7 YedR蛋白转录调控机制分析
4．4本章小结
全文总结与展望
主要创新点
存在的不足与展望
参考文献
致谢
山东大学;
