HGF、C-met、VEGF的表达与星形细胞肿瘤恶性程度及其血管生成之间相互关系的研究

摘要

目的：检测肿瘤组织中的微血管密度,探讨HGF、C-met和VEGF的在肿瘤组织中的表达、分布及其与肿瘤分级及微血管密度的关系,并初步探讨HGF、C-met和VEGF在星形细胞瘤中的表达程度与临床病理相关参数之间的关系。　　 资料方法：收集2008年1月至2010年5月我院神经外科行首次手术切除,保存完好的原发星形细胞肿瘤手术标本93例,其中男53例,女40例,平均年龄(38.33±13.06)岁。按WH02000中枢神经系统肿瘤分类标准,低度(Ⅱ级)、高度(Ⅲ、Ⅳ级)恶性分别为28、65例,幕上肿瘤72例,幕下肿瘤21例。另9例对照组脑组织取自脑外伤行内减压术的患者。　　 免疫组织化学(S-P)法检测HGF、C-met和VEGF的表达:免疫组织化学染色按其说明书操作。高倍镜下随机取5个视野内进行阳性计数。染色阳性信号为星形细胞瘤细胞胞浆内为棕黄色或棕褐色颗粒,无背景着色,根据显色强度和阳性细胞数分为:无阳性细胞为阴性(一),阳性细胞数占细胞总数＜30％为弱阳性(+),阳性细胞数30-60％为阳性(++),阳性细胞数＞60％为强阳性(+++)。　　 免疫组织化学(S-P)法检测微血管密度:免疫组织化学染色按说明书进行操作。根据被CD34抗体染成棕黄色的血管内皮细胞,高倍镜下(×400倍)计数5个视野内微血管的量,求其平均数(平均微血管数/视野)作为MVD。　　 根据标准方法进行RNA抽提和逆转录,RT-PCR检测C-met、HGF和VEGF mRNA的表达。内参为β-actin。针对各靶基因的引物根据GenBank中的相应序列,由日本宝生物公司设计并合成。目的基因的数量用相对定量的方法来表示,内参基因β-actin的数量需进行标准化。　　 统计学分析:对于HGF、C-Met、VEGF的蛋白表达与MVD、性别及年龄间的相互关系进行统计学Spearman等级相关分析,HGF、C-Met、VEGF不同病理级别星形细胞肿瘤间及正常脑组织的mRNA表达进行两样本间的t检验,对HGF、C-MET和VEGF之间的相关关系进行直线相关分析,取α=0.05为显著性检验水准。以上统计学分析均在SPSS13.0软件上进行。　　 结果：　　 1.星形细胞肿瘤组织中HGF、C-MET、VEGF蛋白和MVD的表达情况各级别星形细胞瘤组织中HGF、C-Met和VEGF蛋白的表达阳性率明显高于正常脑组织(P＜0.01),且其表达阳性率与肿瘤组织的病理学分级相关(P＜0.01),与MVD相关(P＜0.01),而与年龄(P=0.78)和性别(P=0.67)无关。HGF、C-met及VEGF-A之间具有显著相关性(均P＜0.05)。　　 2.星形细胞肿瘤中HGF、C-Met和VEGF mRNA的表达情况HGF、C-Met和VEGF-A的mRNA在星形细胞肿瘤中的表达均显著高于正常脑组织(P＜0.01)。HGF、C-Met和VEGF-A在的表达均随星形细胞肿瘤中的病理学分级升高而增高(P＜0.01)。三者的表达在不同级别星形细胞肿瘤中表达具有显著相关性(P＜0.05)。　　 结论：　　 1.HGF、C-Met和VEGF-A在各级别星形细胞肿瘤中均有表达。　　 2.HGF、C-Met和VEGF-A在不同级别星形细胞肿瘤中的表达有显著性差异,因此三者与星形细胞肿瘤的恶性程度密切相关。　　 3.HGF、C-Met和VEGF-A可以作为判断星形细胞肿瘤恶性程度的诊断性指标和用做星形细胞肿瘤基因治疗研究的靶点。