异种去细胞神经支架复合Fibronectin、Laminin质粒修复周围神经缺损的实验研究

摘要

目的：利用分子生物学方法获取兔的纤维连接蛋白（FN）、层粘连蛋白（LN）的基因cDNA构建质粒载体，以山羊胫神经制备去细胞神经支架（ANS），将二者复合后桥接兔坐骨神经神经缺损，进一步研究FN、LN质粒与异种ANS复合后用于修复周围神经缺损的效果及FN、LN两种蛋白的表达情况。　　方法：将兔坐骨神经内FN和LN两个蛋白的基因的cDNA获取、基因扩增，并构建FN、LN质粒载体。取5月龄新西兰大白兔50只，随机分为A、B、C、D、E五组，每组10只，手术切断坐骨神经，建立右侧坐骨神经10mm缺损模型，依次利用对应成分修复神经缺损。A组：复合FN、LN质粒的ANS；B组：复合FN质粒的ANS；C组：复合LN质粒的ANS；D组：单纯ANS；E组：自体神经。于术后4w对实验动物行电生理学检测，于术后12W对修复神经段取材行组织学观察和小腿肌纤维横径等检测，评定神经功能恢复情况，比较不同分组之间的神经损伤再生修复效果水平。对实验动物一般情况观察，创口愈合情况、有无溃疡，患侧肌肉萎缩等，同时，运用蛋白印迹法（Western Blot）检测移植物FN、LN两种蛋白的表达，分析不同实验组两种蛋白表达量的变化。　　结果：1.采用双酶切鉴定FN、LN重组质粒示：FN、LN双酶切，切出条带大小符合理论预期。初步鉴定FN、LN质粒构建成功。2、术后4周行运动诱发电位检测，计算神经传导速度，A、B、C、E实验组均优于D组（P＜0.05），且以A组恢复效果最佳，B、C、E组间无明显差异（见表2）。3、兔腓肠肌纤维横径检测：A、B、C、E实验组腓肠肌横径均大于D组（P＜0.05），且以A组横径最大，B、C、E组间无明显差异（见表3）。4、蛋白印迹法显示FN、LN质粒可促进移植物内FN、LN的表达。　　结论：A组的神经再生效果优于其他B、C、D、E组。经化学去细胞法制备的山羊胫神经去细胞神经支架能够移植于兔，成功修复兔坐骨神经缺损，而且复合FN、LN质粒的ANS在神经修复上的效果明显优于单纯使用ANS。

目录

纤维连接蛋白（FN）在周围神经再生修复中的研究进展