风疹病毒重组蛋白的原核表达及其在血清学检测中的应用

摘要

目的：利用原核表达系统制备具有良好抗原特性的风疹病毒重组蛋白，并以此建立特异性风疹病毒IgG抗体血清学检测方法。　　方法：在NCBI中查找风疹病毒的核酸序列进行比对，利用相关软件对目的片段进行密码子优化，在序列两端加入酶切位点，目的片段经双酶切后连接至pET-32a(+)载体，构建重组表达质粒pET-32a(+)-RV-rE2E1，鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3)，利用IPTG诱导表达，Western Blot方法进行鉴定。利用镍柱亲和层析进行蛋白纯化，获得高纯度的重组蛋白。以重组蛋白作为包被抗原建立间接ELISA检测方法，并检测94份已知的脐带血中风疹IgG抗体，从符合率、特异度、灵敏度三个方面对该检测方法进行评价。　　结果：利用原核表达系统表达的目的蛋白不仅可以被特异性单克隆抗体识别，还可以与风疹IgG阳性人血清反应，同时不与阴性血清反应；应用该蛋白建立的重组抗原间接ELISA法检测94份已知脐带血时，符合率为86.2%(81/94)、灵敏度为84.48%(49/58)、特异度为88.89%(32/36)。　　结论：利用该方法成功制备出了具有较好的风疹病毒抗原特性的重组蛋白，并利用该重组蛋白建立了检测风疹病毒IgG抗体的间接ELISA方法，该重组蛋白具有良好的应用前景，将为风疹病毒人群血清流行病学的调查研究奠定基础。

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