TGF-β1联合CTGF体外干预诱导BMSCs向软骨细胞分化的研究

摘要

目的：探讨在体外TGF-β1、CTGF及两者联合诱导BMSCs向软骨细胞分化的能力。在体外建立适合BMSCs向软骨细胞诱导分化的条件，为软骨组织工程种子细胞—BMSCs的研究提供理论依据。　　方法：1.采用红细胞裂解液的方法分离提取新西兰大耳兔的BMSCs，在体外进行培养并传代。用倒置显微镜下观察原代及2-5代BMSCs的形态；采用H&E染色及电子显微镜观察第4代BMSCs的形态；用细胞免疫组化法及流式细胞检测技术对第4代BMSCs进行鉴定，检测其细胞表面抗原CD34、CD44及CD29的表达情况。并用台盼蓝染色的方法测定BMSCs活力；用MTT法检测原代及2-6代BMSCs的增殖情况。2.用TGF-β1、CTGF及两者联合诱导第4代BMSCs细胞向软骨细胞定向分化。并采用倒置显微镜及H&E染色观察其形态；用阿利新蓝染色法及甲苯氨蓝染色法检测GAG的表达。3.实验结果计量资料以(X±S)表示，采用数据软件SPSS13.0分析，多组比较采用方差分析，若不满足方差分析条件，进行秩转换后再进行方差分析。假设α=0.05，若P<0.05为差异具有统计学意义。　　结果：①用红细胞裂解液的方法能快速分离提取兔BMSCs并能较好的传代培养。②免疫组化法及流式细胞仪法对第4代BMSCs鉴定结果为：BMSCs的表面抗原CD29、CD44阳性表达，而表面抗原CD34阴性表达。③生长曲线显示原代及2-6代BMSCs生长旺盛，其中第4代生长最旺盛。④甲苯胺蓝染色、阿利新蓝染色检测实验组中GAG均有不同程度的阳性表达，且TGF-β1与CTGF联合诱导组明显高于其他2个实验组。　　结论：①BMSCs较容易获得，并可传代培养，具有很强的增殖能力。②TGF-β1和CTGF均可促进BMSCs向软骨细胞方向分化，且两者联合使BMSCs向软骨细胞分化更明显。

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前言

1. 实验材料

1.1实验动物

1.2主要试剂

1.3主要实验仪器

1.4试验耗材

2. 实验方法

2.1 BMSCs的提取、分离及原代培养

2.2 BMSCs的活力检测（用台酚蓝染色法测定细胞活力）

2.3 原代细胞生长曲线的绘制

2.4 BMSCs的传代培养

2.5 细胞爬片的制作

2.6 传代细胞生长曲线的绘制

2.7 BMSCs贴壁率测定

2.8 BMSCs的鉴定

3. 结果

3.1 原代培养BMSCs的形态学观察

3.2原代及2-6代细胞活力检测

3.3原代细胞生长曲线

3.4 2-6代细胞生长曲线

3.5 BMSCs贴壁率

3.6 BMSCs的鉴定

4. 讨论

5. 结论

参考文献

文献综述:骨髓间充质干细胞及其在修复软骨缺损的应用前景

缩 略 语 表

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