组织蛋白酶S基因敲除在小鼠CABG后静脉桥再狭窄作用机制的研究

摘要

目的：冠状动脉旁路移植术(CABG)是治疗冠心病的一种有效方法，但CABG后静脉桥再狭窄发生率高，再狭窄中炎症反应和血管内膜增生为关键过程。有研究称，组织蛋白酶S（Cathepsin S，CatS）在血管再狭窄中起着重要的作用，表达上调。CatS基因敲除以后能否抑制CABG后静脉桥再狭窄，还需进一步深入研究。本研究即验证CatS基因敲除后对静脉桥再狭窄有抑制作用，且这种抑制作用是通过MMP-9含量减少作用的途径，减轻静脉桥血管的再狭窄。　　方法：本次研究以CatS基因敲除后的小鼠为研究对象，作为实验组，以C57BL/6小鼠为对照组，利用Cuff套管技术建立小鼠下腔静脉-颈动脉移植模型，通过基因敲除鉴定，显微镜观察血管内膜增生来证实CatS基因敲除后对静脉桥的再狭窄有抑制作用，同时通过酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA）测定MMP-9酶的含量来进一步探讨CatS基因敲除后对CABG静脉桥再狭窄抑制作用的机制，以此为CABG术后静脉桥再狭窄的防治提供新的理论依据。　　结果：在静脉移植术后不同的时间点（8h、1d、3d、7d、14d、28d），通过对移植静脉取材并处理之后镜下观察发现：术后早期，内膜增生在两组之间无显著差别，随着术后时间的推移，对照组小鼠内膜逐步增生，且变化较为明显，而CatS基因敲除组内膜虽也有增生，但其增生程度较对照组明显减轻；静脉移植术后，随着时间的延长，CatS（-/-）组MMP-9含量表达较C57BL/6组明显减少，尤其是在术后2周，实验组（CatS（-/-）组）和对照组（C57BL/6组）MMP-9含量表达分别为（6.12±0.11）ng/ml和（9.23±0.12）ng/ml，两组比较P<0.05，差异有统计学意义。　　结论：本课题在顺利完成Cuff套管技术建立小鼠下腔静脉-颈动脉移植模型基础上，通过显微镜观察血管内膜增生证实了CatS基因敲除后在一定程度上能对静脉桥再狭窄有抑制作用；并且通过MMP-9含量减少作用的途径，证实其可以抑制内皮细胞及血管平滑肌细胞增殖反应，细胞外基质沉积，减轻静脉桥血管的再狭窄。

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前言

1 材料与方法：

1.1 主要仪器及试剂：

1.2 实验方法：

1.2.1 实验动物及分组

1.2.2 制备Cuff套管：

1.2.3 下腔静脉-颈动脉移植模型的建立

1.2.4 鼠尾DNA提取

1.2.5 CatS基因敲除小鼠鉴定：

1.2.6 观察两组小鼠静脉桥内膜增生情况

1.2.7 两组静脉桥MMP-9含量比较：ELISA检测MMP-9酶的含量比较

1.2.8 统计学分析

2 结果

2.1 PCR引物序列如下表2所示：

2.2 观察两组小鼠静脉桥内膜增生

2.3 两组小鼠静脉桥MMP-9含量表达

3 讨论

4 结论

参考文献

文献综述预防静脉桥再狭窄的基因治疗研究现状

缩略语表

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