CIZ1单克隆抗体的制备

摘要

目的：　　近几十年来，肺癌已经成为世界范围内最常见的恶性肿瘤。目前在多数发达国家，肺癌在男性常见恶性肿瘤中占首位，严重威胁人民健康和生命。我国肺癌新增病例为16万例/年，死亡13万例/年，非小细胞肺癌（NSCLC）占80％，小细胞肺癌（SCLC）占20%。由于其临床发病隐匿，缺乏特征性的征象和生物学检测指标，80%病人为晚期（Ⅲ，Ⅳ）病人，过去的四十年中肺癌的诊断和治疗进展缓慢，诊断后肺癌的5年生存率平均为10%左右。肺癌是是多步骤，多阶段，多因素的过程，同样也是多基因发生异常变化的过程，所以很难有一个单一的特异性的肿瘤标志物能满足这一需求。因此，如何提高肺癌的早起诊断，从而改善肺癌患者的预后具有重要的显示意义。新近发现较为特异性的核基质蛋白Ciz1的突变体可以满足这种早期诊断的条件，针对一期长期抽烟无症状的非小细胞肺癌和仅有淋巴结肿大的肺癌病人诊断率分别可达76%和71%。但目前仅停留在Western blot的实验阶段，有待进一步的临床实验验证并生产出单克隆抗体才能应用到临床实践中。依据该研究提供的线索我们制备抗人CiZ1小鼠的单克隆抗体，以期望能够早日应用于临床诊断。　　方法：　　根据肺癌CiZ1突变的序列，设计寡核苷酸上下链退火延伸，合成突变和野生型序列，构建pGEX-4T-1表达载体。在大肠杆菌中诱导表达GST- CiZ1的野生型和突变型蛋白，利用GST珠子结合后用还原型谷胱甘肽洗脱提纯蛋白，分别免疫两组BALB/c小鼠，每组六只，经过3次免疫之后，用间接ELISA法检测免疫效价，取免疫效价较高的小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用免疫小鼠的蛋白包被抗原板，用ELISA法检测筛选杂交瘤，直至3次检测亚克隆均呈阳性，通过ELISA，Western blot实验鉴定抗体等。　　结果：　　获得了两株突变型的杂交瘤细胞株6C4和5G9，所分泌的抗体对人的CiZ1有很高的特异性。　　结论：　　成功制备了CiZ1突变型的单克隆抗体。该抗体可能在肺癌的早期诊断，靶向治疗和肿瘤疫苗的研制等方面具有重要意义和潜在的应用价值。

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前言

第一部分：CiZ1抗原的制备

1、材料与方法

2方法

3实验结果

4讨论

5结果

第二部分 CiZ1单克隆抗体的制备

1 材料与试剂

2.实验方法

4实验结果

5讨论

6 结论

参考文献

文 献 综 述:肺癌流行病学及相关方面的研究进展

缩 略 语 表

攻读学位期间发表文章情况

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致谢