扬子鳄甲状腺激素受体基因克隆、序列分析及其在不同组织中的表达

摘要

甲状腺激素(TH)作用广泛,通过多种甲状腺激素受体(TRs)、基因调节和非核受体的共同作用完成生理代谢功能。本研究在对甲状腺激素受体 TRα、TRβ的基因克隆、RACE测序分析的基础上，通过对不同组织中的定量 PCR表达、免疫组织化学定位以及 Western Blot蛋白质印迹法半定量表达分析,研究讨论了扬子鳄甲状腺激素受体在不同组织、不同繁殖时期的表达水平差异，旨在为扬子鳄生殖代谢调控机理的研究提供理论参考。
　　本研究通过 RACE技术获得扬子鳄甲状腺激素受体（TRs）基因全长：TRα(1927 bp), TRβ（2190 bp），其中开放阅读框（ORF）分别为1227 bp和1176 bp在TRα和 TRβ中，并分别编码408和391个氨基酸。基因序列结构均包含 N-末端高可变区（A/B区）、DNA结合区（DBD区）、铰链区（D区）、C末端配体结合区（LBD区）。通过氨基酸序列构建系统发育树发现，扬子鳄 TRα与鸟类紧密的聚在一起，TRβ同样与鸟类先聚为一枝，然后再与爬行类聚为一枝。此结果与基于分子生物学证据获得的爬行类与鸟类有较近的亲缘关系的结果基本一致，支持了鳄类在脊椎动物分子进化中的地位。
　　Q-PCR研究的mRNA水平结果与Western Blot研究的蛋白质水平结果基本一致，也显示了 TRs基因在扬子鳄组织器官中广泛分布,但表达水平存在差异。在四月份雌鳄中，TRα在肺、肝脏、甲状腺、心脏中表达水平较高，其中肺最高，与其他组织表达水平差异显著（P<0.05）；TRβ与 TRα在组织中的水平表达变化趋势基本一致。在四月份雄鳄中， TRα在精巢、胰脏、肺、肝脏中表达水平较高，其中精巢中最高，且与其他组织表达水平差异显著（P<0.05）；其中TRβ的表达水平变化也与TRα基本一致。表明雌雄鳄组织器官中 TRs基因水平表达存在明显性别二态性。此外，TRs在不同繁殖时期卵巢组织中的表达也存在显著差异性（P<0.05），其中繁殖期表达水平最高。在繁殖期，扬子鳄需要大量的能量和众多的激素水平调节，以满足其生命活动。TRs在这一阶段表达水平较高对扬子鳄生殖活动具有较大作用。

目录

声明

第一章甲状腺激素受体在脊椎动物中的研究进展

1.1甲状腺激素的生物学特征

1.2核激素受体及甲状腺激素受体的结构特征

1.3 HPT轴对甲状腺激素的代谢调控作用

1.4甲状腺激素对生殖代谢的影响

第二章扬子鳄甲状腺激素受体基因序列克隆与结构分析

2.1引言：

2.2材料方法：

2.2.1实验材料和试剂

2.2.2实验准备

2.2.3实验方法

2.3结果与分析

2.3.1扬子鳄甲状腺激素受体基因RACE结果

2.3.2扬子鳄甲状腺激素受体序列分析

2.3.3扬子鳄甲状腺激素受体基因结构及多序列比对

2.3.4基于扬子鳄甲状腺激素受体基因氨基酸序列构建系统发育树及序列同源性比较

2.4讨论

2.4.1 TRs结构分析

2.4.2 TRs基因序列同源性分析及系统发育分析

第三章TRs mRNA及蛋白在扬子鳄不同组织中的表达和分布

3.1引言

3.2材料与方法

3.2.1实验材料

3.2.2实验试剂与仪器

3.2.3 SABC免疫组织化学法

3.2.4 Western blot蛋白印迹

3.2.5实时荧光定量PCR（Q-PCR）

3.3结果

3.3.1甲状腺激素受体mRNA在扬子鳄不同组织中的定量表达分析

3.3.2扬子鳄TRs基因在卵巢组织中的表达水平分析

3.3.3甲状腺激素受体在扬子鳄不同组织中的蛋白质水平表达差异

3.3.4甲状腺激素受体在扬子鳄不同组织中的定位表达差异

3.3.5扬子鳄TRs基因在卵泡组织中的分布

3.4讨论

3.4.1 TRs在扬子鳄不同组织中的分布表达

3.4.2 TRs在扬子鳄不同组织中的表达及与生殖活动的关系

第四章结论与展望

4.1主要结论

4.2主要展望

参考文献

致谢

附：研究生期间发表论文和获奖情况