扬子鳄雄激素受体cDNA序列的克隆、分析及其在不同组织中的定位与定量表达

摘要

本文利用RT-PCR(reverse transcription PCR)、荧光定量PCR和免疫组织化学技术,研究了扬子鳄雄激素受体 cDNA序列的克隆、分析及其在不同组织中的定位与定量表达。
　　研究得到扬子鳄雄激素受体(Androgen Receptor,AR)的部分cDNA编码区序列。序列长为1625bp,包含终止密码子TGA,共编码441个氨基酸。结构上主要由NTD、DBD、LBD3个结构域组成,与其它脊椎动物一致。氨基酸同源性分析显示,扬子鳄AR氨基酸序列相对保守性。基于AR mRNA序列和蛋白序列分别构建系统发生树。结果显示,在爬行动物中,鳄类先与鸟类聚到一起,再与龟类形成姐妹群,最后其它爬行类相聚。这些结果与传统观点不一致,但是与现在许多从分子生物学角度探讨系统进化关系所得结果一致。对于鳄类的分类地位,鳄类与龟类、鸟类显示了更近的亲缘关系,这个结果与其它分子数据所得的结果一致。
　　荧光定量PCR和免疫荧光组织化学研究显示,AR在扬子鳄的不同组织如心脏、肝脏、肺、胃、胰脏、肾脏、脾脏、卵巢组织中的均有不同程度的定位与定量表达。定位结果与定量结果一致,都显示出 AR在被研究的组织中均有表达,但在不同组织中表达量不同,卵巢和肝脏的AR mRNA表达水平普遍偏高,其次是肺,其余几个器官的表达量较低且无明显差异。推测AR mRNA组织特异性表达情况与组织特异性功能有关。成年扬子鳄不同时期卵巢中的AR mRNA表达量相差较大,虽然这五个月份的雄激素受体表达量都较高,但7月份达到最高值,9月份次之,3月份和11月份它们的表达量仅仅是7月份表达量的一半,1月份表达量相对最少,而且AR都定位在不同卵泡时期的滤泡细胞中。推测AR的表达量与扬子鳄的生产生活状况紧密相关,在产卵期前后都降低,只在产卵期升高,在冬眠前后期较产卵前后期更低。

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第一章 雄激素受体在脊椎动物中的研究进展

1.1 雄激素受体的结构及其作用途径

1.2 雄激素受体的分布及其功能

1.3 ARα和ARβ的探讨

1.4 脊椎动物雄激素受体基因的进化

1.5 本研究的目标和意义

第二章 扬子鳄雄激素受体cDNA序列的克隆及分析

2.1 引言

2.2 材料与方法

2.2.1 实验材料与主要试剂

2.2.2 实验器材处理

2.2.3实验方法

2.3 结果与分析

2.3.1 扬子鳄AR cDNA序列及其相似性分析

2.3.2 扬子鳄AR的结构

2.3.3 AR蛋白多序列比对

2.3.4 基于AR mRNA序列和氨基酸序列进行系统发生分析

2.4 讨论

2.4.1 扬子鳄AR的结构

2.4.2 基于AR氨基酸序列构建系统进化树探讨脊椎动物进化关系

第三章 雄激素受体在扬子鳄不同组织中的定位与定量表达

3.1 引言

3.2 材料与方法

3.2.1 实验材料

3.2.3 免疫荧光组织化学SABC方法

3.2.4 荧光定量PCR法

3.2.5 数据分析与处理

3.3 结果

3.3.1 扬子鳄AR在扬子鳄不同组织中的定位

3.3.2 AR在扬子鳄各组织中的定量表达

3.3.3 AR在扬子鳄卵巢不同发育时期的表达

3.4 讨论

3.4.1 雄激素受体在扬子鳄组织中的分布

3.4.2 AR mRNA在扬子鳄不同组织中的定位、表达与其功能的关系

3.4.3 AR mRNA在扬子鳄卵巢不同发育时期的定位、表达与其功能的关系

参 考 文 献

致谢