TARBP2调控VISA介导抗病毒信号转导机制

摘要

先天性免疫系统是机体抵抗病原微生物入侵的第一道防线。宿主细胞通过模式识别受体 (pattern recognition receptor, PRRs) 感应外来微生物的入侵并且与其病原体相关分子模式 (pathogen associated molecular pattern, PAMPs) 结合，诱导干扰素调节因子3/7以及NF-κB在内的多种转录因子入核，启动Ⅰ型干扰素、炎症细胞因子等转录，从而使细胞建立抗病毒免疫防御机制。　　RIG-I样受体 (RIG-I like receptors, RLRs) 家族是细胞内一类重要的模式识别受体，在识别并结合病毒的dsRNA后，自身由封闭的环化构象转变为活化的线性构象后发生一系列修饰，其暴露的CARD结构域将RIG-I招募到线粒体外膜，通过与锚定在线粒体外膜的VISA相互作用，将抗病毒信号进行传递。接头蛋白VISA进一步发生寡聚化，活化的VISA继续招募下游的TRAF家族的成员，形成VISA信号小体，一方面TRAFs将信号传递给下游的激酶，如TBK1/IKKε；另一方面，VISA信号小体继续招募包括TANK、TRADD等在内的蛋白质,将信号级联放大。最终组成的信号蛋白复合体将抗病毒信号进行传递并最终诱导Ⅰ型干扰素的产生及先天性抗病毒免疫应答反应。　　有关VISA信号复合体的形成机制目前并未完全清楚，RIG-I作为RLRs家族的代表，对于VISA的活化是不可或缺的。基于以往研究者对于VISA互作蛋白报导的高密性，我们选择将VISA上游的RIG-I作为诱饵蛋白，利用酵母双杂交系统筛选了可能与RIG-I有相互作用的蛋白来从而丰富对VISA上游信号转导机制的研究。　　通过筛选鉴定，我们得到了一个同时与RIG-I和VISA有特异性相互作用的蛋白TARBP2 (transactivation response element RNA-binding protein)，我们的研究结果显示，内源性TARBP2与RIG-I及VISA之间的相互作用只存在静息状态下，而在病毒刺激时，TARBP2与RIG-I及VISA不存在相互作用，但是TARBP2的存在能削弱RIG-I及VISA的相互作用。进一步的研究结果表明，利用RNAi干扰技术敲降细胞内源性TARBP2的表达，能够抑制病毒诱导的RIG-I的表达。并且，TARBP2通过抑制TRAF3以及TRAF6泛素化修饰，影响TRAF3及TRAF6的活化或蛋白质稳定性，阻碍VISA信号蛋白复合体的形成或者下游转录因子IRF7的活化和Ⅰ型干扰素的表达。

目录

声明

第1章 引言

1.1.1 天然免疫简介

1.1.2 天然免疫的模式识别受体

1.2.1 RLRs家族成员概述

1.2.2 RLRs介导的细胞信号转导

1.2.3 RLR介导的信号转导机制的调控

1.3Ⅰ型干扰素及其转录激活机制

1.3.1Ⅰ型干扰素概述

1.3.2Ⅰ型干扰素产生的调节机制

第2章 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 细胞以及细胞培养所需材料

2.1.2 构建表达载体所需材料

2.1.3 双荧光素酶报告基因实验所需材料

2.1.4 荧光实时定量PCR所需材料

2.1.5 免疫共沉淀和western blot实验所需材料

2.1.6 设备及其他耗材

2.2 实验方法

2.2.1 细胞培养与瞬时转染

2.2.2 载体构建及质粒提取

2.2.3 双荧光素酶报告基因实验

2.2.4 Q-PCR实验

2.2.5 内源性IRF3二聚化实验

2.2.6 免疫共沉淀与western blot实验

第3章 研究工作

3.1 研究背景与立项依据概述

3.2 实验结果

3.2.1 TARBP2在病毒诱导的IFN-β信号通路中的作用

3.2.2 TARBP2在RLR信号通路中的作用位点

3.2.3 TARBP2对VISA信号复合体组装的影响

3.2.4 TARBP2靶向IRF7并负调控IRF7介导的抗病毒信号通路

3.2.5 TARBP2通过抑制TRAF6的泛素化修饰促进其降解

3.2.6 TARBP2通过靶向TRAF6抑制TRAF6介导的IRF7的K63位泛素化修饰

3.3 讨论与展望

参考文献

致谢

在读期间公开发表论文及科研情况