论文说明
声明
摘要
符号和缩略词
1．1．1根癌农杆菌的特征
1．1．2根癌农杆菌的遗传转化过程
1．2细菌的趋化作用及其分子机理
1．2．1细菌趋化性概述
1．2．2细菌趋化的分子机理
1．2．3根癌农杆菌趋化系统的特点及研究进展
1．3甲基受体趋化蛋白的研究进展
1．3．1甲基受体趋化蛋白的结构和分类
1．3．2可溶性甲基受体趋化蛋白的研究
1．3．3可溶性甲基受体趋化蛋白的细胞定位
1．4研究目的及意义
第2章实验材料和方法
2．1实验材料
2．1．1菌株、质粒、引物
2．1．2培养基和试剂配方
2．1．3工具酶、试剂盒
2．1．4仪器设备
2．2实验方法及步骤
2．2．1 atu0514基因缺失突变菌株的构建
2．2．2回补菌株atu0514hb的构建
2．2．3点突变菌株的构建
2．2．4含有不同长度的atu0514-egfp表达载体的菌株构建
2．2．5细菌双杂交系统及测定半乳糖苷酶活性
2．2．6测定生长曲线
2．2．7游动平板测定
2．2．8毛细管趋化实验
2．2．9荧光融合蛋白的显微镜观察
第3章实验结果与分析
3．1 atu0514基因及其编码蛋白质的生物信息学分析
3．1．1 atu0514基因的位置及保守结构域预测
3．1．2 atu0514基因编码蛋白的跨膜结构预测
3．2根癌农杆菌atu0514基因缺失突变株的构建
3．2．1用于构建atu0514基因缺失突变体的质粒pEX0514的构建
3．2．2构建atu0514基因缺失突变株
3．3根癌农杆菌atu0514基因回补株的构建
3．3．1 atu0514基因回补质粒pCB0514的构建
3．3．2构建atu0514基因回补菌株
3．4 atu0514基因缺失对根癌农杆菌生长的影响
3．5 atu0514基因缺失对根癌农杆菌趋化的影响
3．5．1游动平板法探究缺失atu0514基因对趋化的影响
3．5．2毛细管趋化实验探究atu0514基因缺失对单一物质的趋化响应
3．6细菌双杂交系统体内验证Atu0514与CheW的相互作用
3．6．1构建诱饵质粒pBT-0514M
3．6．2诱饵质粒与猎物质粒的共转
3．7影响atu0514基因编码蛋白细胞定位的结构域
3．7．1含有不同长度的atu0514-egfp重组质粒的构建
3．7．2含有不同长度的atu0514-egfp表达载体的菌株构建
3．7．3融合蛋白Atu0514-GFP的荧光显微镜观察
3．8 MA结构域关键氨基酸位点的分析
3．8．1 MA结构域中点突变位点的选择
3．8．2构建不同点突变的重组质粒
3．8．3不同点突变回补菌株构建
3．8．4游动平板法测定MA结构域中不同点突变对趋化响应的影响
第4章结论与讨论
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
扬州大学;
