声明
摘要
符号说明
文献综述
1．猪繁殖与呼吸综合征
2．PRRSV的流行病学规律
2．1传播方式
2．2流行现状
3．PRRSV的病原学特点
3．1 PRRSV的分类
3．2 PRRSV的理化特性
3．3 PRRSV的培养特性
3．4 PRRSV的抗原性
3．5 PRRSV的生物学特性
4．PRRS的临床特征及病理机制
4．1临床症状
4．2病理变化
4．3主要感染和发病的机理
5．PRRS疫苗研究进展
5．1弱毒疫苗和灭活疫苗
5．2新型疫苗的研究进展
6．PRRS诊断方法研究进展
6．1病毒的分离与鉴定
6．2分子生物学诊断
6．3间接免疫荧光
6．4血清抗体中和试验
6．5酶联免疫吸附试验
7．PRRSV分子生物学研究进展
7．1 PRRSV的基因结构
7．2主要编码的蛋白
8．PRRS的综合防控
第一章PRRSV GP5重组蛋白的原核表达
1．实验材料
1．1毒株和细胞
1．2菌株和载体
1．3主要试剂
1．4主要仪器和耗材
1．5主要试剂的既制
2．实验方法
2．1目的基因的扩增
2．2原核表达载体pET-32a-GP5的构建
2．3重组蛋白的诱导表达
2．4重组蛋白的纯化及鉴定
3．结果
3．1目的基因的扩增
3．2 pET32a-GP5重组质粒的酶切鉴定
3．3重组蛋白的诱导表达
3．4最佳诱导条件的摸索
3．5纯化蛋白的SDS-PAGE分析
3．6纯化蛋白的Western-blot分析
4．讨论与小结
第二章间接ELISA检测PRRSV GP5蛋白抗体方法的建立及初步应用
1．实验材料
1．1标准阳性血清
1．2包被抗原的制备
1．3血清样本
1．4主要试剂耗材和仪器
1．5主要试剂的配制
2．实验方法
2．1最佳抗原包被浓度和血清稀释度的摸索
2．2最佳封闭液和封闭时间的摸索
2．3最佳—抗反应时间的摸索
2．4最佳二抗反应时间的摸索
2．5最佳显色时间的摸索
2．6阴阳性临界值的判定
2．7特异性试验
2．10批间重复性试验
2．11与IDEXX公司试剂盒和间接免疫荧光比较试验
3．结果与分析
3．1最佳抗原包被浓度和血清稀释度的确定
3．2最佳封闭液和封闭时间的确定
3．3最佳—抗反应时间的确定
3．4最佳二抗反应时间的确定
3．5最佳显色时间的确定
3．6阴阳性临界值的确定
3．7特异性试验
3．8灵敏性试验
3．9批内重复性试验
3．10批间重复性试验
3．11与IDEXX公司试剂盒和间接免疫荧光比较试验
4．讨论与小结
第三章抗PRRSV GP5蛋白单克隆抗体的研制
1．实验材料
1．1实验动物
1．2细胞及病毒
1．3主要试剂耗材及仪器
1．4主要试剂的配制
2．实验方法
2．1小鼠的免疫
2．2细胞融合
2．3阳性杂交瘤细胞的筛选
2．4阳性杂交瘤细胞的亚克隆
2．5单克隆抗体亚类的鉴定
2．6腹水的制备
2．7腹水效价的测定
2．8单克隆抗体的反应性鉴定
2．9单克隆抗体的特异性鉴定
2．10单克隆抗体识别表位的初步鉴定
3．结果与分析
3．1小鼠血清抗体效价的测定
3．2阳性杂交瘤细胞的筛选
3．3单克隆抗体亚类的鉴定
3．4腹水的效价测定
3．5 Western-Blot鉴定单克隆抗体的反应性
3．6 IFA鉴定单克隆抗体的特异性
3．7单克隆抗体识别表位的初步鉴定
4．讨论与小结
全文总结
参考文献
致谢
扬州大学;
