KIR2DS4基因对同胞全相合造血干细胞移植的影响

摘要

第一部分探究KIR2DS4基因分型对同胞全相合allo-HSCT预后的影响　　【目的】　　探讨同胞全相合造血干细胞移植过程中KIR2DS4基因及变异体KIR1D对预后的影响。　　【方法】　　以2005年10月~2014年4月行同胞全相合造血干细胞移植的供受体267对为研究对象，用特异性引物聚合酶链(SSP)的方法检测移植前供受者的KIR基因分型，分析KIR单体型及KIR2DS4/KIR1D在供受者中的频率分布，结合临床回顾性资料，探讨KIR2DS4基因及变异体KIR1D对移植预后的影响。　　【结果】　　534例受试者中，检出AA单体型280例，检出B/X单体型254例，AA单体型与 B/X单体型的比率为1.10:1。分析供受者之间单体型的频率分布，无明显差异（P>0.05）。受试者检出的280例AA单体型中，152例检测出两个KIR2DS4等位基因，103例检测出KIR2DS4及KIR1D等位基因，25例仅检测出KIR1D等位基因，KIR2DS4与 KIR1D的分布比例为2:1。分析 KIRAA单体型的供者与受者间的KIR2DS4等位基因的频率分布，差异无统计学意义（P>0.05）。　　1例患者在造血重建之前死亡，164例患者可评估植入，移植后2DS4+2DS4+、2DS4+1D+和1D+1D+三组粒系重建中位时间分别为12天（7天~17天），12天（10天~22天），12天（8天~14天）。三组血小板重建中位时间分别为13.5天（8天~35天），14天（10天~33天），13.5天（11天~29天）。比较三组患者的中性粒细胞植入及血小板植入，差异无明显统计学意义（P>0.05）。存活患者移植后一个月的STR均达到了完全嵌合状态。存活患者移植后1个月左右的KIR基因型全部转变为供体的KIR基因型。　　移植后2DS4+2DS4+、2DS4+1D+和1D+1D+三组累计Ⅱ-ⅣaGVHD发生率分别为52.85％,38.88%和63.54%，差异无统计学意义（P>0.05）。三组累计Ⅲ-ⅣaGVHD发生率分别为28.94%,14.44%和44.44%，差异有统计学意义(P=0.0159)。1D+1D+单体型是Ⅲ-ⅣaGVHD的独立危险因素(HR=4.221,95%CI1.470-12.124, P=0.0070)。三组累计cGVHD发生率为45.15%,38.61%和38.71%，差异无统计学意义（P>0.05）。　　移植后2DS4+2DS4+、2DS4+1D+和1D+1D+三组的累计 CMV感染发生率分别为46.96%,20.16%和63.54%，差异有统计学意义（P=0.0017）。2DS4+1D+单体型是CMV感染的独立保护因素(HR=0.268,95%CI0.125-0.574, P=0.0010)。　　移植后2DS4+2DS4+、2DS4+1D+和1D+1D+组三年的累计复发率分别为21.41%,35.06%和39.42%。三组移植相关死亡（TRM）累计发生率分别为23.87%,26.71%和40.00%，比较三组的累计复发及TRM累计发生率，差异无统计学意义(P>0.05)。　　移植后2DS4+2DS4+、2DS4+1D+和1D+1D+组三年的OS分别为67.86%，49.51%和42.96%，差异无统计学意义（P>0.05）。一年以后三组的OS分别为83.60%，61.69%和53.69%，差异有统计学意义(P=0.0361)。2DS4+2DS4+、2DS4+1D+和1D+1D+组三年的DFS分别58.45%,48.27%和31.25%，差异无统计学意义（P>0.05）。在高危组患者中，2DS4+2DS4+、2DS4+1D+和1D+1D+组三年的DFS分别为51.06%,34.01%和0%，差异有统计学意义( P=0.0314)。　　【结论】　　在受试者中KIR2DS4基因及变异体KIR1D呈偏态分布。对于供体为KIRAA单体型，行同胞全相合 allo-HSCT的患者，KIR2DS4基因分型对移植预后存在影响，1D+1D+组供体尽可能避免选择。　　第二部分KIR2DS4基因mRNA水平的表达及其与同胞全相合allo-HSCT预后的关系　　【目的】　　研究KIR2DS4基因mRNA水平的表达对同胞全相合allo-HSCT的影响。　　【方法】　　以60例行同胞全相合allo-HSCT的患者作为研究对象，其供者的KIR分型为AA单体型，用实时荧光定量 PCR( Real-Time quantitative polymerase chain reaction,Real-Time Q-PCR)的方法检测患者移植后外周血KIR2DS4基因在不同时间点mRNA水平的表达，结合临床资料，探讨KIR2DS4基因mRNA水平的表达在同胞全相合allo-HSCT中的作用。　　【结果】　　免疫耐受组患者在移植后造血重建及1M时KIR2DS4基因的表达水平接近，均低于正常对照，差异有统计学意义（P<0.05）；至移植后3M时患者体内KIR2DS4基因表达水平高于造血重建及1M时 KIR2DS4基因的表达，差异有统计学意义（P<0.05），接近于正常对照。　　2DS4+2DS4+组患者KIR2DS4基因的表达高于2DS4+1D+组患者，差异有统计学意义(P<0.0010)；2DS4+1D+组患者KIR2DS4基因的表达高于1D+1D+组患者，差异有统计学意义(P=0.0010)。　　aGVHD组患者在移植后一个月外周血 KIR2DS4基因的表达水平高于免疫耐受组，差异有统计学意义(P=0.0110)。CMV感染组患者在移植后一个月及三个月外周血KIR2DS4基因的表达水平与同期的免疫耐受组比较，差异未见统计学意义(P>0.05)。复发组患者在移植后一个月外周血KIR2DS4基因的表达水平与免疫耐受组比较，差异未见统计学意义(P>0.05)。　　【结论】　　KIR2DS4基因mRNA的表达与KIR2DS4基因分型密切相关，同时对同胞全相合造血干细胞移植预后有一定的影响。　　第三部分 KIR2DS4基因的膜表达及NK细胞的功能与同胞全相合allo-HSCT预后的关系　　【目的】　　探讨 KIR2DS4基因的膜表达与 NK细胞功能的关系，及其对同胞全相合allo-HSCT预后的影响。　　【方法】　　通过流式细胞术检测12例患者移植后NK细胞上KIR2DS4的膜表达，同时检测体外刺激后NK细胞分泌IFN-r，Perforin，CD107a的水平，探讨KIR2DS4基因的膜表达对 NK细胞功能的影响，进而研究 KIR2DS4基因的膜表达在同胞全相合allo-HSCT中的作用。　　【结果】　　1D+1D+组患者移植后KIR2DS4在NK细胞膜上不表达。2DS4+2DS4+组患者移植后KIR2DS4的膜表达水平高于2DS4+1D+组，差异有统计学意义(P=0.0210)。　　三组患者移植后NK细胞分泌IFN-r的水平有差异，2DS4+2DS4+组患者NK细胞分泌IFN-r的水平高于2DS4+1D+组，差异有统计学意义(P=0.0060)；2DS4+1D+组与1D+1D+组患者比较NK细胞分泌IFN-r的水平，差异没有统计学意义(P>0.05)；2DS4+1D+组与1D+1D+组患者比较NK细胞分泌IFN-r的水平，差异没有统计学意义(P>0.05)。　　三组患者比较 NK细胞上 Perforin及 CD107a的表达，差异没有统计学意义(P>0.05)。　　aGVHD组患者治疗前NK细胞膜上KIR2DS4的表达开始升高，高于同期免疫耐受组，差异有统计学意义(P=0.0210)；治疗后，患者NK细胞膜上KIR2DS4的表达很快下降，低于同期免疫耐受组，差异有统计学意义(P=0.0200)；减停免疫抑制剂后，患者NK细胞膜上KIR2DS4的表达缓慢回升，接近于同期免疫耐受组。　　患者治疗前NK细胞分泌的IFN-r开始升高，高于同期免疫耐受组，差异有统计学意义(P=0.0430)；治疗后，NK细胞分泌的IFN-r很快下降，与同期免疫耐受组比较，差异没有统计学意义(P>0.05)；减停免疫抑制剂后，患者 NK细胞分泌的IFN-r升高，与同期免疫耐受组比较，差异没有统计学意义(P>0.05)。　　患者治疗前NK细胞上Perforin的表达升高，与同期免疫耐受组比较，无明显差异(P>0.05)；治疗后，NK细胞上Perforin的表达很快下降，低于同期免疫耐受组，差异有统计学意义(P=0.0210)；减停免疫抑制剂后，患者NK细胞上Perforin的表达升高，与同期免疫耐受组比较，无明显差异(P>0.05)。　　患者治疗前NK细胞上CD107a的表达升高，高于同期免疫耐受组，差异有统计学意义(P=0.0210)；治疗后，NK细胞上CD107a的表达下降，低于同期免疫耐受组，差异有统计学意义(P=0.0210)；减停免疫抑制剂后，患者NK细胞上CD107a的表达升高，接近于同期免疫耐受组。　　复发组患者在复发前，分子学复发时以及髓外复发时NK细胞膜上KIR2DS4的表达均低于同期免疫耐受组；患者复发前，分子学复发时以及髓外复发时NK细胞分泌IFN-r的水平、NK细胞上Perforin的表达、NK细胞上CD107a的表达均高于同期免疫耐受组。　　【结论】　　KIR2DS4基因的膜表达与NK细胞功能密切相关，移植后KIR2DS4基因膜表达的重建可能影响同胞全相合造血干细胞移植预后。

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引言

参考文献

第一部分 探究KIR2DS4基因分型对同胞全相

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 KIR2DS4基因mRNA水平的表达及其与同胞全相合allo-HSCT预后的关系

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 KIR2DS4基因的膜表达及NK细胞的功能与同胞全相合allo-HSCT预后的关系

材料和方法

结果

讨论

参考文献

结论

综述:激活性KIR基因在异基因造血干细胞移植中的作用

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