靶向阻断RAGE-配体轴对胰腺癌细胞PANC-1增殖和侵袭抑制作用的实验研究

摘要

背景与目的；晚期糖基化终末产物受体是一类多功能多配体受体，参与调控糖尿病、炎症、阿尔海默病等多种病理过程。此外，近期研究表明RAGE及其配体在肿瘤的发生发展中扮演了重要的角色，RAGE-配体系统可通过自分泌方式直接刺激肿瘤细胞的增殖生长、侵袭转移并能增强其耐药性。本实验首先研究胰腺癌高侵袭性细胞株PANC-1中RAGE的表达情况，分析利用特异性封闭型抗RAGE单克隆抗阻断RAGE-配体生物轴对胰腺癌细胞体外生长侵袭的影响，并对其可能的分子机制进行了初步探讨。 方法：①体外培养胰腺癌细胞PANC-1，RT-PCR、FCM法检测胰腺癌细胞PANC-1表面RAGE mRNA及蛋白的表达情况。②不同浓度的anti-RAGE单抗分别与人胰腺癌细胞PANC-1共同培养相应时间，MTT法观察细胞生长情况，流式细胞仪FCM检测细胞增殖凋亡情况及细胞周期改变。免疫细胞化学法检测调亡相关蛋白NF-rb、Caspase-3、Bcl-2的胞内表达情况。⑧,Transwell侵袭实验观测anti-RAGE单抗作用后胰腺癌细胞PANC-1侵袭能力的变化，半定量RT-PCR、ELISA、免疫细胞化学法观察胰腺癌细胞PANC-1中MMP-2、9mRNA及蛋白的表达情况变化。 结果：①胰腺癌细胞PANC-1表面高表达RAGE。②Anti-RAGE单抗可抑制胰腺癌细胞PANC-1的体外生长，在一定范围内呈时间、剂量依赖性，表现为细胞阻滞于G1期，凋亡发生增多，凋亡率上升，NF-Kb、Bcl-2表达明显减少，Caspase-3表达量增强。⑧Anti-RAGE作用后PANC-1细胞的透膜侵袭转移能力明显受到抑制，在一定范围内呈剂量依赖性，同时PANC-1细胞MMP-2、9的表达明显减弱。 结论：胰腺癌细胞PANC-1表面存在RAGE(晚期糖基化终末产物受体)的阳性表达，应用封闭型anti-RAGE单克隆抗体可特异性阻断RAGE介导的受体信号途径，通过下调NF-rb、Bcl-2、MMP-2、MMP-9，上调Caspase-3，从而抑制胰腺癌细胞PANC-1体外生长侵袭行为。结果证实RAGE-配体生物轴是通过自分泌方式维持肿瘤细胞的自主性生长，而抗RAGE抗体可以部分封闭其生物学效应。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分胰腺癌细胞PANC-1中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的表达

材料和方法

结果

讨论

第二部分阻断RAGE介导的受体信号活化对胰腺癌细胞PANC-1生长中增殖与凋亡的影响

材料与方法

结果

讨论

第三部分阻断RAGE介导的受体信号活化对胰腺癌PANC-1细胞生长中侵袭转移的影响

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述RAGE-配体生物轴与肿瘤

攻读学位期间公开发表的论文

致谢