RNAi靶向下调波形蛋白表达对胰腺癌细胞株PANC-1增殖及侵袭能力影响的实验研究

摘要

目的:应用已构建的pGCSIL-GFP-VIM-shRNA质粒研究其对胰腺癌细胞 PANC-1细胞的波形蛋白表达影响及其对胰腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响。将pGCSIL-GFP-VIM-shRNA干扰质粒转染胰腺癌细胞株PANC-1，靶向沉默波形蛋白(VIM)，检测vimentin蛋白表达的变化及基因沉默后胰腺癌细胞增殖和侵袭力的改变，为靶向治疗胰腺癌提供实验依据。
　　方法:通过阳离子脂质体LipofectamineTM2000将pGCSIL-GFP-VIM-shRNA干扰质粒转染胰腺癌低分化细胞株PANC-1，荧光显微镜检测转染后PANC-1细胞中外源绿色荧光蛋白（GFP）的表达。Western Blot法测定转染后PANC-1细胞波vimentin的蛋白表达变化。四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测基因沉默前后PANC-1细胞增殖活性的改变。应用transwell小室检测基因沉默对PANC-1细胞侵袭力的影响。
　　结果:荧光显微镜检测到转染干扰质粒后PANC-1细胞中有GFP的表达。Western Blot法检测到转染后PANC-1细胞中vimentin蛋白水平的表达明显下降，达到了靶向沉默vimentin基因的效果。MTT法检测转染前后PANC-1细胞的增殖活性没有明显改变。Transwell小室检测出靶向vimentin基因沉默的PANC-1细胞穿透基底膜的细胞数量明显低于未转染PANC-1细胞组。
　　结论:干扰质粒pGCSIL-GFP-VIM-shRNA能够有效抑制PANC-l细胞中波形蛋白的表达，而进一步抑制PANC-1细胞的侵袭力，但是对于PANC-1细胞的增殖活性无明显影响。

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附：综述 RNA干扰技术在胰腺癌研究中的应用