声明
摘要
缩略词表
前言
第一章SARA的诱发机制及其并发症和预防措施
1 SARA的诱发机制
1．1导致瘤胃pH降低的原因
2．SARA状态下的炎症反应及继发症
2．1 SARA引起的系统性炎症反应
2．2 SARA引起的继发症种类
3．SARA的临床诊断和预防
第二章SARA所产生的LPS引起天然免疫反应及对脂代谢基因表达的影响
1 瘤胃微生物及细菌免疫原
1．1 LPS一般结构
1．2 LPS的生物活性
1．3 LPS主要诱导的炎症信号通路
2．硬脂酰辅酶A去饱和酶的结构及生物学活性
2．1 SCD1对脂肪酸生成和氧化的调节
2．2 SCD1与胰岛素／Akt信号通路相关
2．3 SCD1与炎症
3 SARA状态下的表观遗传修饰机制
3．1基因的转录调控机制
3．2表观遗传修饰与基因表达
3．3内源LPS引起的基因的表观遗传修饰
第三章短期饲喂高谷物日粮对荷斯坦奶牛和泽西奶牛的系统性肝脏炎症和代谢反应的影响
1材料与方法
1．1主要仪器与试剂
1．2试验动物和试验设计
1．3样品采集
1．4血浆生化指标检测
1．5 RNA提取与定量
1．6蛋白提取和定量
1．7统计
2结果与分析
2．1血液生化与肝脏甘油三酯
2．2肝脏基因表达情况
2．3 mTOR信号通路蛋白表达
3讨论
3．1 血浆中炎症的生物标志物影响
3．2与炎症反应和代谢有关的基因表达
3．3 mTOR信号通路
4小结
参考文献
第四章长期高精料日粮饲喂诱导的荷斯坦奶牛SARA对肝脏内SCD1的表达及脂肪酸组分的影响
1材料与方法
1．1主要仪器与试剂
1．2试验动物和试验设计
1．3样品收集
1．4 LPS及生化指标检测
1．5气相色谱分析脂肪酸含量
1．6 RNA提取，cDNA合成和实时荧光PCR
1．7蛋白免疫印迹实验
1．8数据统计
2结果与分析
2．1瘤胃pH，血浆和瘤胃LPS浓度及乳成分分析
2．2瘤胃液中的VFA含量和血浆中生化指标
2．3瘤胃液和肝静脉血浆中的长链脂肪酸含量
2．4参与肝脏脂质代谢的基因表达
2．5 SCD1蛋白在肝脏中的表达
3讨论
4小结
参考文献
第五章E．coli诱导的奶牛乳房炎对肝脏及乳腺中SCD1基因表达的影响及其机制
1材料与方法
1．1主要仪器与试剂
1．2试验动物和试验设计
1．3染色质收缩状态测定
1．4实时荧光定量PCR
1．5报告基因构建
1．6转录因子的表达构建
1．7细胞培养，转染和报告基因活性的测定
1．8 5'-cDNA末端快速扩增(5'-RACE)实验
1．9启动子上转录因子结合位点分析
1．10统计
2结果
2．3急性乳房炎对肝脏中SCD1启动子的染色质结构的影响
2．4大肠杆菌感染对乳腺和肝脏中SREBP1a和C／EBP因子的基因表达
2．5 SREBP1a和C／EBPs转录因子对SCD1启动子活性的作用
2．6 C／EBP结合位点对SCD1启动子活性的影响
2．7 C／EBPα与C／EBPβ对SCD1启动子活性的影响机制
2．8 SREBPa和C／EBPα对SCD1启动子活性的共同作用结果
3讨论
3．1 C／EBP-α和-β在乳腺细胞和肝细胞中对SCD1启动子活性的影响
3．2 C／EBPβ对SCD1启动子活性的间接影响机制
4小结
参考文献
第六章长期饲喂高精料日粮引起的荷斯坦奶牛肝脏中SCD1基因表达下调的表观遗传调控机制
1材料与方法
1．1主要仪器和试剂
1．2试验动物和试验设计
1．3瘤胃pH和肝脏中甘油三酯含量检测
1．4脂肪酸检测
1．5 RNA提取，cDNA合成和实时荧光PCR
1．6染色质重塑实验
1．7 SCD1启动子DNA甲基化实验
1．9染色质免疫共沉淀分析
1．10统计分析
2结果与分析
2．1瘤胃pH值分析
2．2肝脏甘油三酯含量及血浆中△9长链脂肪酸含量的变化
2．3 SARA状态下脂代谢和炎症反应相关基因表达
2．4 SARA状态下对SCD1启动子的染色质重塑的影响
2．5 SCD1启动子特定位点的DNA甲基化分析
2．6诱导SARA对肝脏中SREBP1c在SCD1启动子上结合的影响
3讨论
3．1 SCD1在反刍动物肝脏脂质代谢中的作用
3．2 SREBP1的表达丰度及其在SCD1启动子区域的结合率
3．3诱导SARA对奶牛肝脏脂肪酸分解代谢的影响
4小结
参考文献
第七章丁酸钠对LPS诱导的奶牛肝细胞炎症反应及脂代谢酶表达的调节作用
1材料与方法
1．1主要仪器和试剂
1．2细胞培养
1．3试验设计
1．4细胞活力检测
1．5流式细胞检测细胞凋亡
1．6 ELISA检测细胞因子
1．7 RNA提取和实时荧光PCR
1．8细胞免疫荧光分析
1．9蛋白免疫印迹实验
1．10统计
2结果与分析
2．1 不同剂量的LPS和SB处理对牛肝细胞活力的影响
2．2丁酸钠对LPS刺激牛肝细胞产生细胞因子的影响
2．3 0．5mM／L的SB和4μg／mL的LPS对肝细胞凋亡的作用
2．4丁酸钠对肝细胞经LPS处理后的炎症和脂代谢基因表达影响
2．5丁酸钠预处理对NF-κB信号通路活化的影响
2．6丁酸钠预处理对LPS刺激的肝细胞中组蛋白H3乙酰化的影响
2．7丁酸钠预处理对牛肝细胞中与脂肪酸代谢有关的蛋白表达的调节作用
3讨论
4小结
参考文献
全文总结
本论文创新点
攻读学位期间发表的学术论文
致谢
南京农业大学;
