粘细菌来源二肽基肽酶Ⅲ的结构与功能初步研究

目录

声明

摘要

符号与缩略语说明

前言

第一章文献综述

1．1 二肽基肽酶Ⅲ的来源与基本性质

1．2二肽基肽酶Ⅲ的结构与催化机制

1．3二肽基酶Ⅲ的生理功能

2蛋白结晶原理及常用方法简介

2．1蛋白结晶的原理

2．2蛋白结晶的基本方法

3粘细菌的子实体发育

3．1粘细菌子实体发育的形态形成

3．2粘细菌子实体发育过程中的信号

第二章来源于Corallococcus sp．EGB二肽基肽酶Ⅲ的基因克隆、表达与酶学性质研究

1 实验材料

1．1菌株、质粒和引物

1．2培养基与试剂

1．3 主要仪器

2 实验方法

2．1 菌株培养

2．2二肽基肽酶III基因mdppⅢ的克隆

2．3二肽基肽酶III基因表达菌株的构建

2．4重组二肽基肽酶mDPPⅢ的诱导表达与纯化

2．6重组酶mDPPⅢ的活性测定方法

2．8重组酶mDPPⅢ的动力学参数测定

2．9序列分析软件、在线分析网址

3结果与分析

3．2 mdppⅢ的序列分析

3．3重组酶mDPPⅢ的表达纯化

3．4 MutT活性的测定

3．6金属离子对重组酶mDPPⅢ的影响

3．7重组酶mDPPⅢ的动力学参数

4本章讨论

5 本章小结

第三章重组二肽基肽酶mDPPⅢ的晶体学研究

1 实验材料

1．1菌株与培养基

1．2试剂与仪器设备

2实验方法

2．2 native-mDPPⅢ结晶实验

2．5 Se-mDPPⅢ结晶实验

2．7 mDPPⅢ关键位点氨基酸突变

3结果分析

3．1 native-mDPPⅢ结晶实验

3．2 Se-mDPPⅢ的纯化

3．4 mDPPⅢ晶体结构解析

3．5 mDPPⅢ关键位点定点突变

4本章讨论

5本章小结

第四章mDPPⅢ在粘细菌中功能的初步研究

1．实验材料

1．1菌株、质粒和引物

1．2培养基与试剂

1．3 主要仪器

2． 实验方法

2．1质粒构建

2．2粘细菌M．xanthus电转化

2．3粘细菌发育

2．4 Western Blot检测

2．5胞外多糖的检测

2．6 A信号分子的制备

2．7 A信号分子对子实体发育的影响

3结果与分析

3．1表达载体的构建

3．2菌株的表达

3．3菌株发育情况

3．4胞外多糖检测

3．5 A信号分子对子实体发育的影响

4本章讨论

5 本章小结

参考文献

全文总结

主要创新点

下一步工作设想

附录

攻读硕士学位期间发表的论文

致谢