基于3D细胞培养技术评估猪肺炎支原体气溶胶疫苗的安全性

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摘要

缩略语及符号

绪论

第一章文献综述

1猪肺炎支原体

1．1猪肺炎支原体生物学特性

1．2猪肺炎支原体致病机理

1．3猪肺炎支原体疫苗

2气雾免疫

2．1气雾免疫的优势

2．2气溶胶

2．3气溶胶疫苗

3猪气管上皮细胞

3．1猪气管上皮细胞的形态结构与生理功能

3．2猪气管上皮细胞的培养方法

3．3气液交界面培养技术

3．4气液交界面培养技术的应用

第二章基于气液交界面培养的猪传代气管上皮细胞系3D模型的建立及优化

1．2主要试剂及仪器

1．3猪气管上皮细胞系的冻存、复苏与传代

1．4猪气管上皮细胞系ALI培养模型的初步建立

1．5猪气管上皮细胞系ALI培养条件的优化

1．6优化后的猪气管上皮细胞系白亡JALI培养及鉴定

1．7统计分析

2结果

2．1传代STEC的最佳ALI培养时间选择

2．2培养基中血清浓度的优化

2．3培养基中添加的辅助因子的优化

2．4传代STEC细胞ALI培养模型的建立

3讨论

4小结

参考文献

第三章猪肺炎支原体不同毒力菌株对猪气管上皮3D细胞的损伤差异与机制分析

1．1菌种与细胞

1．2主要试剂及仪器

1．3传代STEC细胞ALI培养模型的建立

1．4猪肺炎支原体菌液的培养

1．5 Mhp感染ALI培养的STEC

1．6激光共聚焦鉴定支原体黏附试验

1．7 NAC抗氧化剂处理

1．8细胞形态学鉴定

1．9细胞活性检测

1．10细胞黏液分泌检测

1．11细胞氧化应激检测

1．12统计分析

2结果

2．1 Mhp感染STEC细胞的检测

2．2扫描电镜观察细胞形态

2．3感染细胞生长特性检测

2．4感染细胞活性检测

2．5感染细胞黏液分泌量的检测

2．6感染细胞氧化应激检测

2．7 NAC抗氧化剂对各感染组细胞损伤的影响

3讨论

4小结

参考文献

第四章基于3D细胞培养技术评估气溶胶接种方式的安全性

1材料与方法

1．1菌体与细胞

1．2主要试剂

1．3传代STEC细胞ALI培养模型的建立

1．4猪肺炎支原体菌液的培养

1．5猪肺炎支原体168株活疫苗的染色标记

1．6气溶胶喷雾装置的设计

1．7气溶胶雾化试验过程

1．8气溶胶疫苗安全性评估

1．9激光共聚焦鉴定支原体黏附情况

1．10喷雾小室的改进和优化

1．11激光共聚焦鉴定Mhp黏附情况和荧光强度

1．12细胞形态学鉴定

1．13细胞活性检测

1．14细胞黏液分泌量检测

1．15细胞内源性ROS检测

1．16细胞炎性因子分泌检测

1．17统计分析

2结果

2．1 Mhp感染STEC．幺$胞的检测

2．2扫描电镜观察细胞微绒毛分化情况

2．3感染细胞生长特性检测

2．4感染细胞活性检测

2．5感染细胞黏液分泌量检测

2．6细胞内源性RoS检测

2．7细胞炎性因子分泌检测

3讨论

4小结

参考文献

结论

附录

致谢

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