葛根提取物对更年期骨质疏松症的功能性研究

摘要

葛根是中医常用的祛风解表药,近几十年的研究证明葛根异黄酮具有明显的活血化淤作用,对高血压、冠心病、心肌梗塞等具有较好的疗效.该实验以去卵巢的雌性成年大鼠作为更年期骨质疏松模型,观察葛根提取物对去卵巢大鼠骨-钙代谢的作用.实验包括:一、葛根提取物总异黄酮和葛根素含量的测定.总异黄酮含量测定以葛根素为标准品,采用紫外分光光度法.测定结果:葛根提取物A中总异黄酮含量为33.38％,葛根提取物B中总异黄酮含量为95.62％.葛根素含量测定以葛根素为标准品,采用高效液相色谱法(HPLC).测定结果:葛根提取物A中葛根素含量为14.14％,葛根提取物B中葛根素含量为89.69％.二、葛根提取物对更年期骨质疏松的功能性研究.90只3月龄SD雌性成年大鼠,手术切除双侧卵巢后5天分别给予葛根提取物A1 0mg/kg(OVX-A-10),20mg/kg(OVX-A-20),40mg/kg(OVX-A-40)、葛根提耳取物B5mg/kg(OVX-B-5),10mg/kg(OVX-B-10),20mg/kg(OVX-B-20)或己烯雌酚(,雌激素,阳性对照组,OVX-E),连续喂养3个月;同时设假手术组(未切除双侧卵巢,为正常对照组,Sham)和去卵巢模型组(OVX).除假手术组和去卵巢模型组外,其它各组大鼠每日晨用葛根提取物或己烯雌酚灌胃处理.动物实验结束后立即处死,称重并收集骨骼及血液样品.测定大鼠骨骼形态学指标(骨长、骨鲜重、骨近中远三点横径),胫骨矿物质含量,胫骨中钙、磷、锌、镁的含量,血清中Ca、P含量和碱性磷酸酶(ALP)活性,股骨密度和肱骨生物力学性能等.结果表示:(1)与去卵巢组相比,OVX-A-20、OVX-A-40、OVX-B-10、OVX-B-20组胫骨钙含量显著增加,分别增加了52.7％,72.9％,72.1％,76.7％;(2)OVX-A-40、OVX-B-10、OVX-B-20组的股骨密度较去卵巢组显著增加,分别增长了4.7％,4.5％,5.8％;(3)服用葛根提取物的各组大鼠的肱骨强度与去卵巢组相比均有显著的提高,其中以OVX-A-40组和OVX-B-20组最为明显,分别增加了4.4％,4.7％;(4)葛根提取物能显著降低ALP活性,从而抑制骨的高转换状态.从该实验可以得出:1、葛根提取物对去卵巢大鼠具有增加骨密度,增强骨强度,改善骨质疏松的作用;2、葛根提取物对骨质疏松的疗效与剂量有一定的相关性.葛根提取物A在10mg/kg-40mg/kg范围内对去卵巢大鼠的骨质疏松有改善作用,以40mg/kg最为有效.葛根提取物B在5mg/kg-20mg/kg范围内对去卵巢大鼠的骨质疏松有改善作用,以10mg/kg和20mg/kg最为有效;3、葛根中的异黄酮对更年期骨质疏松症有明显的改善作用,并且葛根素是葛根中改善更年期骨质疏松症的主要功能性成分.三、葛根提取物的急性毒理学实验.小鼠20只(雌雄各半),随机分为2组,每组1 0只.以总异黄酮600mg/kg(临床推荐剂量(100mg/人.天)的300倍)作为给药剂量一次性灌胃,观察两星期内的死亡率.结果显示:两星期内葛根提取物A和B两组小鼠均无死亡,表明葛根提取物没有明显的毒性.因此葛根是一种很有前景的改善更年期骨质疏松症的天然产物.

目录

文摘

英文文摘

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引言

1更年期骨质疏松症的研究现状

1.1骨质疏松症的定义及分类

1.2更年期骨质疏松的病因

1.3更年期骨质疏松的临床症状

1.4更年期骨质疏松的治疗

2葛根提取物改善更年期骨质疏松症的理论依据

2.1植物异黄酮的化学本质与生物学功能

2.2葛根的主要有效成分及生物学作用

3本研究的目的和意义

3.1目的

3.2意义

4研究内容

4.1葛根提取物中总黄酮和葛根素的含量的测定

4.2葛根提取物对更年期骨质疏松症的功能性研究

4.3葛根提取物的急性毒理学实验

研究一：葛根提取物总异黄酮和葛根素含量的检测

1实验材料

2仪器设备与试剂

3实验方法

3.1葛根提取物中总异黄酮含量的检测---紫外分光光度法

3.2葛根提取物葛根素含量的检测---高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)

4.实验结果

4.1总异黄酮标准曲线

4.2葛根素标准曲线

4.3样品测定结果

研究二：葛根提取物对更年期骨质疏松症的功能性研究

1实验动物

2日粮组成及主要营养水平

3卵巢切除术与骨质疏松动物模型的建立

3.1手术器材与药品

3.2麻醉与手术方法

3.3术后护理与饲养

4实验材料

5实验设计

6样品收集与预处理

7骨-钙代谢的检测

7.1仪器及设备

7.2药品与试剂

7.3骨形态学指标测量

7.4胫骨矿物质含量（bone mineral content,BMC）的测定

7.5股骨密度的测定

7.6肱骨生物力学性能的测定

7.7胫骨Ca、P、Zn、Mg无机元素测定

7.8血清中钙(Ca)、磷(P)含量及碱性磷酸酶(ALP)活性测定

8实验数据的统计学处理

结果与分析

1实验前后大鼠体重的变化

2葛根提取物对大鼠骨生长发育的影响

3葛根提取物对大鼠胫骨矿物质含量的影响

4葛根提取物对大鼠股骨密度(BMD)的影响

5葛根提取物对去卵巢大鼠肱骨强度的影响

6葛根提取物对大鼠胫骨钙、磷、镁、锌含量的影响

7血清指标检测结果分析

研究三：葛根提取物的急性毒理实验

1实验动物

2实验药品

3实验方法

4结果

讨论

1骨质疏松动物模型的建立

2阳性对照的选择

3骨大体形态学的比较

4骨矿物质含量和骨密度的比较

5肱骨强度的比较

6钙(P)、磷(P)、锌(Zn)、镁(Mg)对骨代谢的影响

7血清中与骨代谢有关生化指标的变化

8葛根提取物疗效与剂量关系的分析

9体重的影响

结论

参考文献

致谢

作者简介