交织顶孢霉保肝物质的分离纯化、结构鉴定与生物活性的研究

摘要

继交织顶孢霉(Acremoniumimplicatum(Milleretal.)Gams)菌丝体发酵研究开发和胞外、胞内多糖的研究后,该文以对发酵产品的全方位有效利用为出发点,对发酵菌丝体中保肝活性物质进行了研究.主要内容包括:保肝活性物质HG的提取分离工艺,纯化技术路线,HG的理化性质,化学结构及生物活性.通过脱脂溶剂筛选试验和提取正交试验,确定了最佳提取工艺:以石油醚为脱脂溶剂,以1∶8比例加水,50℃旋转浸提90min,离心后上清液浓缩,加入95﹪乙醇醇沉至70﹪去除多糖,离心后上清液浓缩至小体积得到HG粗提物.HG纯化的技术路线:HG粗提物→硅胶吸附色谱法→SephadexLH-20凝胶色谱法→高效液相色谱法→纯品HG.HG初步纯化采用硅胶吸附层析色谱法.选用200—300目的硅胶,洗脱剂为氯仿:乙酸乙酯:异丙醇:水=8:4:4:0.5(1﹪氨水),HG粗品dHG得率约为0.25﹪.以SephadexLH-20凝胶对HG粗dHG进行进一步的分离纯化.对流动相的筛选试验结果表明,80﹪和40﹪的甲醇对目标产物的分离效果相似,而80﹪甲醇的纯化效果优于100﹪甲醇,但最终均未能完全纯化HG粗品,仅仅得到HG的次纯品hypo-HG.在凝胶色谱纯化的基础上将hypo-HG用高效液相色谱进行进一步的纯化,最终分离纯化得到两种物质HG-1和HG-2,HG-1为主要成分,而HG-2为次要成分,得率很低.HG-1和HG-2在hypo-HG中各占比例约为90﹪、10﹪.分别采用薄层层析法、化学方法和高效液相色谱法进行纯度鉴定,结果表明HG-1,HG-2均为单一组分.实验结果表明,粗品dHG与HG次纯品hypo-HG预处理明显降低了由CCl<,4>所致大鼠肝损伤引起的GPT、GOT活性的升高,同时明显升高了Catalase活性以抵御炎症的发生,降低了由CCl<,4>所致肝损伤引起的MDA含量的增加;然而dHG(50mg)预处理好于hypo-HG (50mg)预处理组.

目录

文摘

英文文摘

综述（真菌活性物质及保肝流行性物质的研究）

引言

材料与方法

结果与分析

1预备试验

1.1目标成分的初步定性试验

1.2提取方法的探索试验

2 HG的提取

2.1提取前的预处理

3 HG的制备

3.1流动相的选择

3.2 HG的分离制备：吸附色谱法－硅胶(200-300目)

3.3 HG的纯化

4纯度鉴定

4.1薄层层析法

4.2高效液相色谱法

5结构测定

5.1 HG-1结构组成的结构测定

5.2 HG-2结构组成的结构鉴定

6粉碎方式的研究

6.1粉碎后菌粉粒度的比较

6.2薄层分析

6.3 HPLC分析

7 HG活性研究

7.2 HG次纯品hypo-HG与粗品dHG的活性比较研究

讨论

结论

参考文献

致谢

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