查尔酮合酶基因RNAi表达载体构建及矮牵牛遗传转化研究

摘要

本文利用短干涉RNA(siRNA)进行了矮牵牛查尔酮合成酶(CHS)基因短干涉RNA片段表达载体的构建，研究了矮牵牛再生体系和基因枪介导、农杆菌介导遗传转化体系，并进行矮牵牛CHS基因的RNAi载体转化研究。得到如下结果： 1.构建了两个抑制矮牵牛查尔酮合成酶(CHS)基因表达的RNAi表达载体pBI121-CHS。 2.建立了成熟的矮牵牛再生体系。通过正交试验，研究了不同激素水平下对矮牵牛再生体系的诱导效应，确定诱导愈伤组织的最适宜培养基。通过矮牵牛对照株对不同浓度Kan的敏感性试验，得出适宜的筛选浓度为80mg/L。利用此浓度，可对转化后矮牵牛植株进行抗性筛选。 4.初步建立了基因枪介导的转基因体系。研究了不同轰击距离和次数对转化效果的影响，确定了适宜的基因枪轰击参数为轰击距离。 5.初步建立农杆菌叶盘法介导转基因体系。研究了不同农杆菌菌液浓度和侵染时间对矮牵牛无菌苗叶盘分化率的影响，确定适宜的菌液感染浓度OD600=0.5，侵染时间5min。 6.通过对矮牵牛抗性苗PCR及Southern杂交分子检测，进一步证明外源基因已整合至矮牵牛基因组中。 7.观察对比Southern杂交验证株与未转化植株在田间花色表现，可以看出，转基因株与对照株相比，花色变浅，花脉部有轻微白色斑点条纹。

目录

文摘

英文文摘

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文献综述

引言

材料和方法

1.试验材料

2.仪器设备和试剂

3.试验方法

3.1表达载体的设计原则

3.2干涉表达载体的构建

3.3矮牵牛遗传转化体系研究

结果与分析

一、干涉表达载体的构建

1.1目的基因片段的选择

1.2干涉表达载体的构建

二、矮牵牛遗传转化研究

(一)矮牵牛再生体系建立

(二)矮牵牛遗传转化研究

三、转基因植株的分子检测

四、转基因株花色表现

讨论

结论

参考文献

附录A:查尔酮合成酶基因序列

致谢

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