安祖花Arizona品种遗传转化体系的优化及矮牵牛查尔酮合成酶基因(PhCHS)的导入

摘要

安祖花(Anthurium andraeanum)是近年来非常流行的年宵花卉之一.为了优化安祖花的遗传转化体系,本研究以安祖花Arizona品种组培苗的叶片为外植体,将构建好的重组质粒pSN 1301-HYG-PhCHS在根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens) GV3101介导下转化安祖花.优化后的体系为:首先将组培苗幼嫩叶片切块后置于1/3MS预培养基(附加200 mg/L NH4NO3,0.5 mg/L BA,0.05 mg/L 2,4-D,5 g/L琼脂,30 g/L蔗糖)中预培育3d,然后用根癌农杆菌(菌液OD600=0.5)侵染10 min,将侵染过的叶片接种于MS培养基,28℃黑暗条件下共培养3d,之后转移到附加有500 mg/L羧苄青霉素和30 mg/L潮霉素的愈伤诱导培养基中进行筛选.结果表明,抗性愈伤组织形成率可达到5％～6％.对体系优化过程中获得的14株抗性转基因植株进行PCR检测,其中9株为阳性,证实矮牵牛查尔酮合成酶基因(Petunia hybrida chalcone synthase gene,PhCHS)已经转入安祖花Arizona中.该研究结果为利用转基因方法改良安祖花品种提供了技术保障.