低能离子注入黄曲霉甾体转化株诱变选育色素突变体的研究

摘要

在现代生物医药产业中，甾体类化合物的生物修饰是生物转化技术的热点领域之一，有着巨大的经济效益和社会效益。本研究涉及的黄曲霉甾体转化株，具有很强的甾体C11位α-羟基化能力，但是该菌种在发酵的过程中会产生一种红色色素，用常规的方法难以去除，从而影响到产物的分离与纯化。本研究利用低能离子对黄曲霉甾体转化株进行诱变，研究了离子束诱发色素突变适宜的技术参数，进行了色素突变体的筛选和突变体遗传稳定性分析，利用RAPD技术初步分析了色素突变体的变异，获得如下主要结果： 1.低能离子注入黄曲霉孢子后，呈现出一种先降后升再降的“马鞍型”剂量存活曲线；在相同的能量和剂量下，质量数越大的离子，菌株的存活率也越低；N+注入的平均突变率明显高于Ar+。出发菌株最适的注入离子为N+，最适的注入能量为10keV、注入剂量为1.56×1015ions/cm2～2.08×1015ions/cm2。 2.经过两轮筛选，选育出不产红色素的突变菌株AF-NR。与出发菌株相比，在λ=395nm处的吸光度有了明显的降低。对该菌株进行了进一步的纯化和传代实验，结果表明该菌株在遗传性状上表现稳定。同时，甾体转化率的薄层层析估测表明，低能离子注入没有明显影响到该菌株的羟化能力。 3.选用102条随机引物对出发菌株和突变菌株的基因组DNA进行了RAPD比较分析。结果显示：76条引物在两池具有扩增产物，其中8条引物在两池间表现有多态性，有多态性扩增的引物频率为7.85％，表明离子注入诱发了出发菌株基因组DNA分子的变异。将随机引物S96、S382、S388扩增出的差异性片段克隆后测序，发现随机引物S96扩增所得差异性片段与AspergillusfumigatusAf293hypotheticalprotein(Afu6g02340)的部分mRNA有很高的同源性，而S382扩增所得差异性片段与烟曲霉3-异丙基苹果酸脱氢酶的部分mRNA和AspergillusnidulansFGSCA4hypotheticalprotein(AN5886.2)，mRNA有很高的同源性，其意义还有待于进一步的研究。 4.初步研究了发酵条件对发酵过程中红色素生成的影响：发现发酵时间的长短对于色素的生成影响较大，而培养温度、接种量、底物浓度则对色素的生成影响不大。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：插图和附表清单

独创性声明及关于论文使用授权的说明

一、文献综述

二、引 言

三、材料与方法

四、结果与分析

五、讨 论

六、结 论

参考文献

附 录

致 谢

作者简介