线粒体融合蛋白2表达下调对于多柔比星诱导的心肌细胞凋亡的影响

摘要

背景：　　多柔比星（Doxorubicin，D O X)是一种临床上广泛使用且效果显著的抗肿瘤药物，然而它的临床应用却受限于其心肌毒性，即能通过尚未明确的机制诱导心衰。线粒体融合蛋白2(Mitofusin2, Mfn2)是一种横跨于线粒体外膜且具有GTP酶活性的蛋白，通过细胞内复杂的信息交流调控线粒体的融合过程。　　目的：　　探索心肌细胞内Mfn2表达下调在多柔比星诱导的心肌细胞凋亡过程中的作用。　　方法：　　本实验用的是培养的原代心肌细胞，来源于1到3天内出生的Sprague Dawley（S D)大鼠。建立多柔比星诱导的心肌细胞凋亡模型，实验组然后分为3组，D O X组和Mfn2转染处理组以及Mitotempo预处理组，以正常心肌细胞作为对照组，对照组不做任何处理，M fn2转染组先在心肌细胞内转入M fn2激活质粒然后再用D O X处理，Mitotempo预处理组先用Mitotempo预处理1小时然后再用D O X处理。用免疫蛋白印迹法（Western Blotting, W B)检测心肌细胞中M fn2的表达。分别用DCFDA法和线粒体特异性荧光染料MitoSOX检测心肌细胞内和线粒体中的活性氧族成分（Reactive oxygen species，R O S)。通过检测心肌细胞内Caspase3的活性和TUNEL染色法两种手段来检测心肌细胞的凋亡。　　结果：　　1. DOX诱导心肌细胞产生大量的ROS并且诱导了心肌细胞的凋亡。　　2.与此同时，在D O X的刺激下，心肌细胞中Mfn2含量的表达也随之下降。增加心肌细胞中Mfn2的表达可以抑制心肌细胞线粒体中有害活性氧成分的升高。　　3.增加心肌细胞内Mfn2的表达和使用线粒体特异性抗氧化剂Mitotempo均能够减少DOX诱导的心肌细胞凋亡。　　结论：　　在 DOX诱导的心肌细胞凋亡中，心肌细胞Mfn2的表达下调发挥了重要的作用，这一作用的实现与心肌细胞内损害性活性氧的产生有关；线粒体特异性抗氧化剂Mitotempo能抑制D0X诱导的心肌细胞凋亡。

目录

声明

缩略词

引言

第一部分多柔比星诱导心肌细胞凋亡及对Mfn2表达的影响

1 材料与方法

1 .1原代心肌细胞

1 .2主要试剂与仪器

1 .3实验方法

1 .4数据整理和统计分析

2 结果

2.1 D O X对心肌细胞凋亡的影响

2.2 DOX对于心肌细胞Mfn2表达的影响

2 . 3心肌细胞转染M fn2模型的建立

2.4 M f n 2下调对于心肌细胞凋亡的影响

3 讨论

4 结论

第二部分Mfn2对 DOX诱导的心肌细胞ROS表达的影响

1 材料及方法

1 .1实验动物

1 .2主要试剂与仪器

1 .3实验方法

1 .4统计学分析

2 结果

2 .1多柔比星对心肌细胞ROS表达的影响

2.2 Mitotempo对于多柔比星刺激的心肌细胞R O S表达的影响

2.3 Mfn2对于多柔比星刺激的心肌细胞ROS表达的影响

3 讨论

4 结论

第三部分Mfn2抑制DOX诱导的心肌细胞凋亡的机制

1 材料及方法

1 .1实验动物

1 .2主要试剂与仪器

1 .3实验方法

1 .4统计学分析

2 结果

2.1 Mfn2对于多柔比星刺激的心肌细胞ROS表达的影响

2.2 Mfn2和Mitotempo对于多柔比星刺激的心肌细胞)周亡的影响。

3 讨论

4 结论

结论和展望

结论

展望

参考文献

综述：线粒体融合蛋白2 与心肌细胞凋亡关系的研究进展

致谢