声明
中英文对照缩略词表
序言
2.实验材料
2.1实验试剂
2.2实验器材
2.3实验仪器
3.实验方法
3.1 宫颈癌细胞株的复苏与培养
3.1.1 人宫颈癌细胞株的复苏
3.1.2 细胞系传代
3.1.3 细胞铺板
3.1.4 细胞冻存
3.2 慢病毒转染
3.3 Western Blot（蛋白质免疫印迹实验）测定蛋白表达
3.3.1 细胞蛋白样品的制备
3.3.2 BCA法测定蛋白浓度
3.3.3 步骤
3.4 克隆形成实验
3.5 细胞划痕实验
3.6 Transwell （8μm，24孔板）实验检测细胞迁移能力
3.7 Matrigel Transwell （8μm，24孔板）实验检测细胞侵袭能力
3.8 EdU实验检测细胞增殖
3.9 PCR 检测
3.9.1 RNA分离
3.9.2 逆转录制备cDNA
3.9.3 实时定量PCR检测
4．实验结果
4.1 miR-487b对宫颈癌细胞生长有负调控作用
4.1.1转入miR487b前体序列的反义序列，构建miR-487b下调的稳转细胞株
4.1.2 miR-487b下调促进宫颈癌细胞生长
4.1.3 miR-487b下调促进宫颈癌细胞增殖
4.1.4 miR-487b下调促进宫颈癌细胞迁移
4.1.5 miR-487b下调促进宫颈癌侵袭
4.2 KAT6B是 miR-487b作用的靶基因
4.2.1 预测结果
4.3 进一步验证KAT6B是miR-487b的靶基因
4.3.1 构建敲除KAT6B的宫颈癌细胞，在KAT6B敲除的基础上再转入miR-487b前体及前体的反义序列
4.3.2 敲除KAT6B后，转入miR487b前体及前体的反义序列对细胞生长无明显影响
4.3.3 敲除KAT6B后，上调或者下调miR487b表达对细胞增殖无明显影响
4.3.4敲除KAT6B后，转入miR-487b前体及前体的反义序列对细胞迁移无明显影响
4.3.5敲除KAT6B后，转入miR-487b前体及前体的反义序列对细胞侵袭无明显影响
4.4. miR-487b可能通过AMPK-AKT-mTOR信号通路，调控宫颈癌增殖、迁移、侵袭等作用
4.4.2在敲除KAT6B的基础上，转入miR-487b前体及反义序列，KAT6B表达、磷酸化AMPK、磷酸化mTOR、AKT、PDGFR、EGFR等表达较KAT6B敲除组无明显变化
5.讨论
6.结论
参考文献
本课题信号通路示意图
综述
参考文献
附件
附件1 miR-487b qRT-PCR 引物序列
附件2 目的核酸序列
致谢
攻读硕士期间发表的论文
江苏大学;
