烟草硝酸还原酶基因NIA启动子的克隆及其互作蛋白的筛选

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致谢

摘要

1文献综述

1．1烟草氮素研究进展

1．1．1氮素对烟草生长发育的影响

1．1．2氮素同化过程

1．1．3硝酸还原酶的研究进展

1．2启动子

1．2．1启动子的结构与类型

1．2．2启动子研究方法

1．3转录因子

1．3．1转录因子的结构

1．3．2转录因子的功能

1．3．3转录因子研究方法

1．4酵母单杂交

1．4．1酵母单杂交的原理

1．4．2酵母单杂交的主要步骤

1．4．3酵母单杂交的优缺点

2引言

3材料与方法

3．1试验材料及仪器

3．2烟草基因组模板的获得

3．3 NIA1、NIA2基因启动子片段的克隆

3．4诱饵序列的获得

3．5启动子重组载体构建及植株转化

3．6 GUS活性分析及酶联免疫反应定量分析

3．7运用SMARTTM技术构建烟草K326品种cDNA文库

3．8诱饵载体的构建和诱饵报告菌株的获得

3．9报告基因本底表达水平的测定

3．10酵母单杂交文库的构建和初步筛选

3．11阳性互作的确认和质粒的提取鉴定

3．12互作蛋白的生物信息学分析

4结果与分析

4．1 NIA1与NIA2基因启动子片段的克隆

4．2 NIA1及NIA2基因启动子序列分析

4．2．1 NIA1基因启动子序列分析

4．2．2 NIA2基因启动子序列分析

4．3 GUS组织染色及定量分析结果

4．4诱饵报告菌株的PCR鉴定

4．5诱饵报告菌株的AbA背景抑制浓度测定

4．6烟草K326 cDNA文库构建结果

4．7酵母单杂交文库的初步筛选结果

4．8酵母质粒的提取与鉴定

4．9 NIA启动子片段结合蛋白的生物信患学分析

4．9．1 NIA1启动子片段筛选阳性克隆生物信息学分析

4．9．2 NIA2启动子片段筛选阳性克隆生物信息学分析

4．9．3 4xNRE2诱饵片段筛选阳性克隆生物信息学分析

4．9．4阳性克隆三维结构同源建模及进化树的构建

5结论与讨论

5．2三个诱饵片段均筛选到多个阳性克隆

5．3筛选的部分阳性克隆被预测有转录因子功能

5．4结论

参考文献