梨茎尖和叶片高效离体繁殖再生体系建立

摘要

建立稳定、高效的叶片不定梢再生体系是梨转基因成功的关键环节。为此本试验以梨离体芽苞作外植体，在初代培养诱导试管苗成功的基础上，分别以MS、AS和1/2MS培养基为基本培养基，附加不同的激素组合，根据培养基配方及培养条件，通过正交试验设计并结合方差分析和多重比较，研究不同培养基对梨试管苗芽增殖影响；叶片愈伤组织的诱导及愈伤组织的分化和试管苗生根的影响。试验研究获得的主要结果如下：
　　 1、外植体消毒及初代培养
　　 将外植体用75％酒精处理10s后再用0.1％HgCl2消毒4min时，取得最佳消毒效果。外植体芽诱导的适宜培养基为1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2mg/L。
　　 2、增殖培养
　　 鸭梨茎段增殖的适宜培养培养条件是以1/2MS为基本培养基，附加0.8mg/L的6-BA；0.3mg/L的IBA及0.5mg/L的GA3，增殖倍数为3.83；黄冠梨茎段增殖的适宜培养条件是以AS为基本培养基，附加0.8mg/L的6-BA；0.1mg/L的IBA及0.5mg/L的GA3，增殖倍数为3.56；基本培养基对梨茎段增殖和生长无显著影响；不同浓度的6-BA处理，差异达到了显著水平。
　　 3、愈伤组织的诱导与再生
　　 试验从两个梨品种叶片上再生出不定芽，建立起黄冠和鸭梨叶片再生不定芽体系。叶片离体培养以1/2MS培养基为基本培养基，附加不同浓度TDZ和IBA，结果以1/2MS附加2.5mg/L的TDZ及0.5mg/L的IBA适宜鸭梨叶片诱导愈伤及分化的培养基组合；以1/2MS附加0.5mg/L的TDZ及0.5mg/L的IBA为适宜黄冠叶片诱导愈伤组织及分化的培养基组合；在适宜条件下，鸭梨和黄冠叶片再生频率达到65.28％和66.67％，平均再生芽数为4.78和3.17。4、梨苗生根以1/2MS+1.0mg/LIBA的培养基诱导鸭梨和黄冠的生根效果稍好，生根数、根长，统计均显著高于其他处理。