NAA/6-BA对铁皮石斛试管苗生长发育和生物碱积累的研究

摘要

铁皮石斛是我国名贵的中草药，富含石斛多糖和生物碱等多种生物活性成分。由于铁皮石斛对生长环境的要求苛刻，铁皮石斛的自然资源几乎濒临灭绝。目前，主要是通过组织培养技术提供试管苗，但组织培养中人们只是通过以往经验来添加外源激素，外源激素对内源激素的调控及内源激素含量的变化尚不明确。
　　 为此，本实验采用高效液相色谱法测定铁皮石斛内源激素含量，对其色谱条件进行摸索，并添加外源激素来研究外源激素对其铁皮石斛试管苗生长发育进程、内源激素和生物碱积累的影响，以期为人们在铁皮石斛试管苗培养中更加合理有效的添加外源激素提供理论依据。主要研究结果如下：1．HPLC测定铁皮石斛内源激素时，用80％甲醇浸提，反复离心后，经Sep-Pak C18预柱0.45μm微孔滤膜纯化，样品不需经过氮气吹干，可直接检测。ZT和IAA测定的色谱条件为：两者均采用ODS-C18反相色谱柱(250mm×4.6mm):柱温40°C；流速1.0ml/min；进样量为10μl，外标法峰面积定量。检测ZT时流动相比例为乙腈：水=30:70(V/V):检测波长270nm；检测IAA的流动相比例为甲醇：0.1％乙酸＝54：46(v/V)；检测波长230nm。ZT和IAA相对标准偏差分别为0.93％和1.07％，回收率分别为91.66％和82.09％。
　　 2．铁皮石斛种子5-7周后萌发形成原球茎，9-10周后形成根状茎，进一步发育成芽和根，最后形成幼苗，整个过程14-15周。种子形成根状茎时ZT/IAA为17.67，铁皮石斛内源ZT和IAA的含量能够满足种子萌发的需要。在铁皮石斛芽形成前，不添加外源激素有利于种子萌发和形成芽。
　　 3．NAA/6-BA为1:10，铁皮石斛试管苗繁殖系数为7.5，相对于对照提高了178.4％。铁皮石斛试管苗株高增加缓慢，试管苗分化形成大量丛生芽。添加NAA/6-BA为1:10后，培养初期铁皮石斛试管苗内ZT含量增加IAA下降，而后期ZT含量下降IAA含量上升。60天时试管苗内源ZT/IAA为8.49，比对照提高了103.1％。铁皮石斛发育前期可添加NAA/6-BA为1：10以促进试管苗发芽。
　　 4．NAA/6-BA为10:1时，铁皮石斛试管苗鲜重和株高增加较快，并且形成大量的根。添加NAA/6-BA为10:1后，培养初期IAA含量上升而ZT含量下降。60天时试管苗内源ZT/IAA为2.94，比对照降低了29.7％。铁皮石斛发育后期添加NAA/6-BA为10:1可以促进试管苗生根。
　　 5．NAA/6-BA为1:10时，铁皮石斛试管苗中生物碱含量相对于对照提高了4.8％，同时促进了铁皮石斛试管苗中POD和PAL活性的提高，促进生物碱的积累。