T-2毒素对猪原代肝细胞的毒性效应机制研究

摘要

T-2 毒素属单端孢霉烯族化合物，是该类毒素中毒性较强的一种，主要由镰刀菌产生。T-2 毒素广泛存在于谷物食品中，人类和动物暴露T-2 毒素会引发各种疾病，畜禽暴露T-2 毒素还可能致动物源食品残留，间接危害人类健康。掌握该化合物的致毒机制对制定抗毒措施非常重要。本论文以不同剂量（0、0.02、0.05、0.1 μg/mL）T-2 毒素暴露的猪原代肝细胞为实验材料，运用基因芯片杂交和荧光差异双向电泳（2-D DIGE）结合MALDI-TOF MS/MS 生物质谱分析技术，分别从基因和蛋白水平研究了T-2 毒素对猪原代肝细胞的毒性效应及其机制，得到如下主要结果：
　　 1.基因芯片结果显示0.05μg/mL T-2 毒素暴露猪原代肝细胞后共有1193个基因产生显著变化，包括562个表达上调基因和631个表达下调基因。这些变化的基因涉及氧化还原、免疫反应、转运、蛋白酶解、细胞粘附、脂类代谢、凋亡等多个生物学过程。用Real-time 荧光定量PCR验证了参与肝脏外源物质代谢的P450 家族基因(CYP3A39、CYP3A46和CYP2C42)以及环氧化物酶EPHX1和羧酸酯酶CES1C4基因，结果上述基因mRNA表达均呈现不同程度的升高，与芯片变化趋势相同，提示这些酶可能参与了T-2 毒素的体内转化和代谢过程。
　　 2.运用荧光差异双向电泳（2-D DIGE）技术研究0.05μg/mL T-2 毒素暴露后猪原代肝细胞蛋白表达谱变化，发现了260个差异蛋白。选择剂量-效应明确，且界限清晰的蛋白点，采用MALDI-TOF MS/MS 生物质谱技术进行鉴定，成功鉴定出84 差异蛋白，包括34个表达上调蛋白和50个表达下调蛋白。用Gene Ontology、KEGG数据库以及Pathway StudioTM (v7.0)软件分析发现它们主要参与蛋白结合、电子传递、信号传导、应激反应、脂类代谢等生物学功能和信号通路。这些蛋白的改变可能与T-2 毒素所致肝细胞损伤以及疾病形成过程有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：图表目录、缩略词

声明

第一章文献综述

第二章引言

第三章暴露T-2 毒素对猪原代肝细胞毒性效应的基因组学分析

第四章暴露T-2 毒素对猪原代肝细胞毒性效应的蛋白质组学分析

全文总结

参考文献

致谢

附录

作者简介

硕士在读期间发表的论文