尖孢镰刀菌T-DNA插入突变体表型筛选及耐药相关基因功能解析

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第一章 绪 论

1.1 镰刀菌感染现状

1.1.1 临床感染

1.1.2 农业感染

1.2 真菌耐药现状

1.2.1 常用抗真菌药物及其作用机制

1.2.2 假丝酵母属和曲霉属耐药机制

1.2.3 镰刀菌属耐药现状

1.3 根癌农杆菌介导的遗传转化

1.4 麦角甾醇的生物合成

1.5 真菌Zn(II)2Cys6锌簇蛋白研究进展

1.6 研究的目的和意义

第二章 尖孢镰刀菌突变体的表型筛选

2.1 材料

2.1.1 菌株

2.1.2 培养基及缓冲液

2.1.3 试剂

2.1.4 仪器设备

2.2 方法

2.2.1 尖孢镰刀菌突变体库的构建

2.2.2 生长发育异常突变体的筛选

2.2.3 生长发育异常突变体的药物敏感性试验

2.2.4 生长发育异常突变体T-DNA插入位点的定位

2.2.5 药物敏感性异常突变体的筛选

2.3 结果

2.3.1 尖孢镰刀菌突变体库的建立及验证

2.3.2 生长发育异常的突变体

2.3.3 生长发育异常突变体的T-DNA插入位点

2.3.4 生长发育异常突变体的药物敏感性

2.3.5 药物敏感性异常的突变体

2.4 讨论

2.5 本章小结

第三章 尖孢镰刀菌突变体FOM263基因功能分析

3.1 材料

3.1.1 菌株

3.1.2 培养基及缓冲液

3.1.3 试剂

3.1.4 仪器设备

3.2 方法

3.2.1 突变体FOM263 T-DNA插入位点的定位

3.2.2 单基因敲除株Δ18528和Δ03305的构建

3.2.3 敲除株Δ03305和Δ18528的药物敏感性试验

3.2.4 敲除株Δ03305形态观察及生长曲线

3.2.5 基因FOXG_03305生物信息学分析

3.2.6 敲除株Δ03305和野生型的细胞壁完整性观察

3.2.7 敲除株Δ03305和野生型的麦角甾醇含量测定

3.2.8 敲除株Δ03305和野生型相关基因mRNA表达水平的验证

3.3 结果

3.3.1 突变体FOM263 T-DNA插入位点分析

3.3.2 敲除株Δ18528和Δ03305的构建

3.3.3 敲除株Δ03305和Δ18528药物敏感性变化

3.3.4 敲除株Δ03305形态变化及生长曲线

3.3.5 基因FOXG_03305编码Zn(II)2Cys6锌簇蛋白

3.3.6 敲除株Δ03305细胞壁完整性变化

3.3.7 敲除株Δ03305麦角甾醇含量变化

3.3.8 敲除株Δ03305相关基因mRNA表达水平的变化

3.4 讨论

3.5 本章小结

第四章 结论

参考文献

附录

作者简介及在学期间所取得的科研成果

致谢