台湾虫草菌丝体及子实体的成分研究

摘要

台湾虫草CordycepsformosanaKobayasi&Shimizu，其无性型为黄山被毛孢Hirsutellahuangshanensis。本文首次对台湾虫草菌丝体及人工培养的子实体进行了系统的研究，主要内容包括：对台湾虫草的无性型菌株RCEF0868进行了液体和固体培养，采用杯碟法对台湾虫草发酵液和菌丝粉的抑菌活性做了初步研究；对摇瓶培养菌丝体、深层发酵菌丝体及人工培养子实体的多种成分进行了分析；采用同时蒸馏萃取法(SDE)提取了不同培养方式下获得的台湾虫草菌丝体及人工培养子实体的挥发性成分，并应用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)对挥发性成分进行了分析；对台湾虫草的急性毒性作用和亚急性毒性作用作了初步研究。
　　 抑菌试验结果表明：台湾虫草发酵液和菌丝体中含有天然的抗菌活性物质。6种不同的摇瓶发酵液对6种测试菌的抑菌活性不一样，对金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌有抑菌效果，其中对金黄色葡萄球菌的抗菌作用最强，对白色念珠菌、大肠杆菌、绿脓杆菌没有抑菌活性；从发酵液的热稳定性效果分析，初步推测该抗菌成分可能对热不敏感；以金黄色葡萄球菌为指示菌，测定不同培养液培养的菌丝粉的水提液的抑菌作用，发现其与发酵液抑菌效果相当；以金黄色葡萄球菌为指示菌，检测暗养天数对台湾虫草菌丝粉的抑菌活性影响，发现抗菌活性在第11d和第19d期间不断增强；从不同溶剂浸提物的抑菌效果看，该抗菌活性物质较易溶于水，应属于极性较大的物质。
　　 成分分析结果显示，粗脂肪、多糖在摇瓶菌丝体与发酵菌丝体中的含量相当，均高于子实体；粗蛋白在3种培养物中的含量相当而且丰富；氨基酸总量、必需氨基酸总量在摇瓶菌丝体中最高，分别为67.56g/100g、19.39g/100g；甘露醇和胞苷在深层发酵菌丝体中的含量最高，分别为27.53mg/g，2.44mg/g；麦角甾醇在子实体中含量最高，达6.75mg/g；腺苷含量结果显示，摇瓶菌丝体(1.57mg/g)>子实体(1.32mg/g)>深层发酵菌丝体(0.96mg/g)；常量元素Ca、Mg在3种培养物中含量都较为丰富；微量元素Zn、Cu在子实体中的含量最高，Fe、Mn、Ni、Se在深层发酵菌丝体中的含量最高；摇瓶菌丝体中的As和Cd及深层发酵菌丝体中As的含量均低于0.20μg/g；子实体中未检测出Pb的含量，3种培养物Hg的含量均低于0.20μg/g。
　　 GC-MS分析表明：不同培养方式对台湾虫草挥发性物质的数目和含量有较大影响，对挥发性成分的类型影响不大，主要为醇类、烯类、酯类、酚类和醚类化合物；液体和固体培养菌丝中分别鉴定出17种、12种挥发性物质，分别以1-辛烯-3-醇(51.63％)和2-癸烯-5-内酯(41.13％)的相对含量最高，人工培养子实体中鉴定出15种挥发性物质，以1-辛烯-3-醇的相对含量最高(37.70％)；3种人工培养物挥发性物质的共有成分为1-辛烯-3-醇、2-癸烯-5-内酯、2，6-二叔丁基对甲酚及4-羟基-3-叔丁基-苯甲醚。
　　 台湾虫草菌丝粉急性毒性试验结果显示，一次性大量给药，台湾虫草对小鼠无毒副作用，小鼠灌胃的最大耐受量大于7.88g/kg。
　　 台湾虫草菌丝粉亚急性毒性试验结果显示，剂量达到最大试验剂量时(即3.94g/kg)，每周7次灌胃，连续灌胃30d，台湾虫草对大鼠各项受试指标未见明显毒性反应。