雪松松针内生真菌的分离及抑菌活性研究

摘要

植物内生真菌能够产生新型化合物，是开发高效、无残留农药的重要资源。本文从健康雪松的松针组织中分离筛选得到两株具有抑菌活性的内生真菌菌株，编号分别为N03和N06，对常见的几种植物病原真菌具有抑制作用，对其发酵液及菌丝体的活性做出了初步的研究，对N03菌株的发酵条件进行了初步优化。主要研究结果如下：
　　 1.采用组织分离法，从雪松的松针组织中分离得到11株内生真菌。通过平板对峙法，测定11株内生真菌分别对辣椒疫霉病菌(Phytophthoracapsici)、番茄枯萎病菌(Fusariumoxysporum.Fsp.Lycopersici)、苹果炭疽病菌(Peziculamalicorticis)、梨黑星病菌(Venturiapirina)、苹果腐烂病菌(Cytosporamandshurica)和小麦赤霉病菌(Fusariumgraminearum)这六种常见植物病原真菌的拮抗作用。结果表明，11株雪松植物内生真菌对6种供试植物病原真菌都具有拮抗作用，其中N03和N06菌株作用效果明显，对辣椒疫霉病菌，番茄枯萎病菌和苹果炭疽病菌表现较强抑菌活性。通过抑菌圈法将11株内生真菌分别对金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureu)、大肠杆菌(Escherichiacoti)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)和稻白叶枯病菌(Xanthomonascampestris)4株常见病原细菌进行抑菌试验。结果表明，内生真菌对病原细菌的抑菌活性有差异，其中同N10菌株对金黄色葡萄球菌的抑菌活性为100μg/ml链霉素抑菌直径的54.11％，而N05菌株对枯草芽孢杆菌的抑菌活性达到100μg/ml链霉素的70.86％。
　　 2.通过对雪松内生真菌的发酵液和菌丝体进行生物测定。结果表明，内生真菌发酵液对不同植物病原真菌抑菌活性存在差异，其中N03菌株发酵液对苹果腐烂菌(Cytosporamandshurica)抑制率达到80.56％，N06菌株对辣椒疫霉菌(Phytophthoracapsici)抑制率达到80.74％。抑制菌丝生长速率法测定菌丝体甲醇提取物对病原菌的抑菌效果，结果发现N03菌株菌丝体甲醇提取物活性较明显。N03菌株不同时间发酵液的抑菌活性与菌丝体发酵过程中生物量试验表明，内生真菌N03菌株在生长过程中产生的抑菌活性物质与发酵天数及生物量相关。
　　 3.N03菌株生长特性实验结果表明，该菌株的最佳生长温度为28℃，其生长最适碳源为木糖，最适氮源为蛋白胨，pH为5-9，以牛肉膏蛋白胨培养基生长最好。N03菌株发酵条件初步优化结果显示，最适的碳源是可溶性淀粉，最适的生长的氮源是无机氮硝酸钠，单因子正交试验结果显示麦芽糖、蛋白胨和KCl+FeSO4·7H2O+MgSO4·7H2O组合对N03菌株发酵产出抑菌活性物质条件最佳。检验N03菌株发酵液在番茄植株上的防效，试验结果表明发酵液对番茄枯萎的治疗作用为28.8％，保护作用为57.14％。