Kisspeptin/NKB在大鼠下丘脑表达与血液中含量变化的研究

摘要

kisspeptin为视黄酸家族神经肽，由肿瘤抑制基因kiss-1编码合成，主要位于大脑丘脑背内侧核，孤束核和延髓腹外侧区尾部，2003年发现其参与生殖调控。神经激肽B(neurokininB，NKB)是哺乳动物神经系统速激肽(tachykinin)家族的主要成员，广泛分布于中枢和外周神经组织中。最近发现，神经激肽B对青春期正常功能也有重要的作用。kisspeptin可刺激促性腺激素释放的研究较多，并得到了大量的证实，与此相比，有关神经激肽B的相关研究报道却很少见。本实验以出生期、幼年期、初情前期、初情期和成年的大鼠为研究对象，采用免疫荧光双标结合显微共聚焦方法，探明kisspeptin、NKB在大鼠生长发育进程中下丘脑的定位，研究kisspeptin/NKB在下丘脑时相和空间表达的变化规律，并结合放免、酶联免疫分析(ELISA)等方法，检测睾酮、雌二醇、kisspeptin、NKB在大鼠血液中的含量，为研究kisspeptin、NKB在生长发育进程中的作用及其机制提供一定的形态学依据。
　　 结果显示：(1)kisspeptin在大鼠初情期发育进程中下丘脑的腹内侧核、弓状核和室旁核、视前区出现不同程度的表达。①雌性大鼠：kisspeptin在幼年雌鼠下丘脑的腹内侧核、弓状核的表达强度显著高于初生期(P<0.05)、发情前期(P<0.05)、初情期(P<0.05)和成年期(P<0.05)；初情期除室旁核各部位的表达强度显著高于初生期(P<0.05)、发情前期(P<0.05)和成年期(P<0.05)；初情前期和成年期各部位的表达强度差异不显著(P>0.05)；幼年期弓状核的表达强度最高，腹内侧核次之；初情期腹内侧核的表达强度显著高于弓状核(P<0.05)、室旁核(P<0.05)和视前区(P<0.05)。②雄性大鼠：kisspeptin在弓状核的表达强度在初情前期时达到最高，幼年期次之，其次是初情期，成年期表达强度最弱；幼年期和初情期时，腹内侧核的表达强度差异不显著(P>0.05)，但均显著高于初生期(P<0.05)、发情前期(P<0.05)和成年期(P<0.05)；初情期时，室旁核的表达强度显著高于初生期(P<0.05)、幼年期(P<0.05)、发情前期(P<0.05)和成年期(P<0.05)；初情期时，腹内侧核和弓状核的表达强度差异不显著(P>0.05)，但显著高于室旁核(P<0.05)和视前区(P<0.05)。(2)NKB的表达与kisspeptin大体相似，但具体位置不完全相同，总体来说表达强度要高于kisspeptin。①雌性大鼠：幼年期下丘脑的腹内侧核和弓状核的表达强度显著高于初生期(P<0.05)、发情前期(P<0.05)、初情期(P<0.05)和成年期(P<0.05)；初情期时，腹内侧核和室旁核的表达强度显著高于初生期(P<0.05)、发情前期(P<0.05)和成年期(P<0.05)，弓状核的表达强度显著低于初情前期(P<0.05)，高于其他三个时期；初情前期，弓状核的表达强度显著高于腹内侧核(P<0.05)、室旁核(P<0.05)；成年时，弓状核的表达强度显著低于腹内侧核(P<0.05)、室旁核(P<0.05)。②雄性大鼠：NKB在初情期各部位的表达强度均显著高于初生期(P<0.05)、幼年期(P<0.05)、发情前期(P<0.05)和成年期(P<0.05)；幼年时，弓状核的表达强度显著高于初生期(P<0.05)、发情前期(P<0.05)和成年期(P<0.05)；初情前期和成年期格部位间的表达强度差异不显著(P>0.05)。(3)kisspeptin/NKB在各时期的血清浓度差异不显著。(4)雌二醇的含量在初生及幼年时非常低，在初情前期时达到最高，随后逐渐下降；睾酮在幼年及初情前期时含量最低，且两者之间差异不显著(P>0.05)，而在成年时含量最高，其次是初情期。
　　 根据以上结果得出结论：(1)kisspeptin在雌鼠幼年期和初情期出现高强度表达，在雄鼠，初情前期弓状核、初情期各部位表达强度均较高。总体来说，kisspeptin在雌鼠下丘脑的表达强度高于雄鼠，提示，kisspeptin在调控大鼠生殖启动的时间上存在性别差异。(2)NKB在雌鼠和雄鼠下丘脑的表达强度差异不显著，均在幼年和初情期出现高强度表达，但在雄鼠初情期的表达强度高于幼年，提示，NKB在调控大鼠生殖启动的时间上存在一定的性别差异。(3)kisspeptin/NKB在大鼠生长发育进程中血清中的含量无显著的变化趋势，提示kisspeptin/NKB主要在下丘脑表达并发挥作用。(4)雌二醇在雌鼠初情前期含量最高，随后逐渐下降，kisspeptin后三个时期变化趋势与之大体相反，但并不严格；睾酮在雄鼠成年时最高，NKB在雄鼠各时期含量的大体趋势与之相接近，提示kisspeptin/NKB在生殖启动中扮演重要角色。