不同类型牛GPR54基因启动子变异与其表达水平的关联性

摘要

本文旨在研究不同类型牛GPR54基因启动子的变异对GPR54基因表达水平的影响，以揭示牛GPR54基因多态性与牛早熟性之间的关联性。试验提取荷斯坦牛(HT)、皖东牛(WD)及江淮水牛(JH)3种类型牛血液白细胞总RNA，通过PCR、测序、RT-PCR和双荧光素酶报告基因的方法，检测不同类型牛GPR54基因启动子区973bp区域的多态性，启动子效率以及GPR54基因的表达水平，分析启动子变异在牛品种、年龄和性别间对GPR54基因表达的效应。采用线性模型解析年龄和性别与GPR54基因表达的效应。结果表明：
　　1.根据比较基因组学原理，比较不同类型牛群内的多态性，皖东牛GPR54-973片段存在3个多态性位点，检测出3种基因型CCCCTT、AATTCC和ACTCCT，分别位于-947bp、-816bp和-754bp，荷斯坦牛中仅发现1种基因型，即CCCCTT，而江淮水牛除对应位点的基因型为CCTTCC，其他位点还存在多个SNP位点，构成了WD、HT和JH的不同启动子型。
　　2.根据检测出的启动子型，对3种基因型和3种牛GPR54基因启动子进行双荧光素酶检测，结果显示CCT基因组合启动效率是ATC组合的3倍，是ATC/CCT型的1.39倍（P<0.01）；3种牛启动子的启动效率存在着极显著的差异，其中启动子HT效率是JH的4.44倍（P<0.01），是WD的1.99倍（P<0.01）；启动子WD效率是JH的2.24倍（P<0.01）。
　　3.比较荷斯坦牛、皖东牛和江淮水牛血液白细胞GPR54基因的表达水平，结果显示，荷斯坦牛和皖东牛GPR54基因的表达水平分别是江淮水牛的4.34和2.25倍（P<0.01），其结果与上述启动子效应相一致。

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文献综述

1.牛初情期的研究进展

2.GPR54基因的研究进展

3.GPR54基因在牛遗传育种中的应用

4. 展望

1 引 言

2 材料方法

2.1 试验材料

2.2牛血液DNA的提取及检测

2.3牛血液白细胞总RNA提取及检测

2.4 牛血液白细胞GPR54基因表达量测定

2.5 启动子区扩增与SNP检测

2.6 启动子双荧光素酶报告基因分析

2.7 重组质粒转染细胞及双荧光素酶检测

2.8 数据分析

3 结果分析

3.1 血液DNA和RNA提取效果

3.2 不同类型牛GPR54基因启动子结构比较

3.3 不同类型牛GPR54基因启动子作用效率比较

3.4 不同类型牛白细胞GPR54基因表达水平比较

4.讨 论

4.1 遗传因素在牛早熟性中的主导作用

4.2 牛的早熟性与GPR54基因的多样性有关

4.3 转录因子对基因调控的影响

5 结 论

参考文献

致谢

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